第二章化学沉淀法.pptVIP

透析液 浓缩的蛋白混合样品 透析袋 开始透析 处于平衡状态 透析法 （二）有机溶剂沉淀法 原理 原理 A. 破坏水化膜： 由于使用的有机溶剂与水互溶，它们在溶解于水的同时从蛋白质分子周围的水化层中夺走了水分子，破坏水化层，使蛋白质沉淀。 B. 降低溶剂介电常数 减小溶剂的极性，从而削弱了溶剂分子与蛋白质分子间的相互作用力，增加了蛋白质之间的作用力，因相互吸引而聚集沉淀。 （二）有机溶剂沉淀法 常用有机溶剂： 丙酮、异丙酮、乙醇、甲醇等。 缺点：蛋白质易变性 操作：低温，沉淀分离后快稀释， 添加少量无机盐，pH接近pI，用量试验确定，可先浓缩。 （二）有机溶剂沉淀法 有机溶剂与水混合时，会放出大量的热量，使溶液的温度显著升高，从而增加有机溶剂对蛋白质的变性作用，有机溶剂要缓缓加入，防止溶液局部升温。 温度还会影响有机溶剂对蛋白质的沉淀能力，一般温度越低，沉淀越完全。 因此，所用的有机溶剂须预先冷却到-10℃；在使用有机溶剂沉淀生物大分子时，整个操作过程应在低温下进行 。 有机溶剂沉淀法的影响因素 1、低温下操作 （二）有机溶剂沉淀法 2、中性盐作用 较低浓度的中性盐存在有利于沉淀作用，减少蛋白质变性。一般中性盐浓度以0.01～0.05 mol/L为好，常用的中性盐为醋酸钠、醋酸铵、氯化钠等。 3