定量聚合酶链反响QPCR测定技术应用与其临床应用.pptVIP

TaqMan实时荧光定量PCR 分子信标实时荧光定量PCR 动力学定量PCR方法 第一步：确定PCR扩增的效率； 第二步：根据相应的公式计算原始模板数。 扩增效率的计算(1) 如果在PCR每一个扩增循环中扩增效率为常数，则可通过在PCR扩增的指数期的数个连续的或非连续的周期中取扩增样本，然后测定每份样本中的产物Yn的量来测定E值。有必要收集2份以上的样本，最好是尽可能多的样本以确证扩增效率保持恒定；换句话说，也就是PCR尚未达到扩增效率开始降低时的阶段。如果取的是连续的样本，则可从公式（1）测得E值； 扩增效率的计算 扩增效率的计算(2) 如果取的样本不连续，则可使用下述将公式（2）重排后得到的更为通用的公式，用参数j（取样中间隔的周期数）替代n，Yj（在较高循环周期数取样的产物量）替代Yn，Yi-j（在较低循环周期数取样的产物量）替代X： E＝－1＋（Yi/Yi-j）1/j (3) X(原始模板数)的计算 一旦效率确定后，根据公式（4）可从测定的产物量和循环周期数计算得到X。公式（4）来源于公式（2）的重新排列： X＝Yn /(1＋E)n （4） X的另一种计算方式(1) 另一种方式是，根据公式（2）的对数形式，以所测定的Yn