实验室细胞培养规程汇报.pptxVIP

细胞培养汇报;原代培养 传代培养 胰蛋白酶处理分离细胞 细胞的冻存 冻存细胞的复苏 MTT法检测细胞活力 常见的细胞染色法 ;一、原代培养;组织块培养; 养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块置温箱中静止培养 待细胞从组织块游出量增后，再补加培养液 ;分散细胞培养;消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，液体变酸，用NaHCO3调整。 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。 ;二、传代培养;悬浮型细胞的传代培养;在新的培养容器内加入步骤3计算出的所需添加的新鲜培养基及细胞悬液。如有必要，可在培养容器内充满无菌过滤的CO2，封好培养容器并置于合适的温度下孵育培养。 通常情况下，换液时不需要每次都完