ICP-MS等三种测定蛹虫草菌丝体中硒含量方法的比较-.docVIP

硒含量方法的比较1 王莹1 康平利3铁梅4张蕊3 贲松彬1 黄子棋1 吕永通1侯潇1薛男1陈长兰2* 1辽宁大学生命科学院,沈阳(110036 2辽宁大学药学院,沈阳(110036 3辽宁大学化学院,沈阳(110036 4辽宁大学环境学院,沈阳(110036 E-mail: chenchanglanbio@ 摘 要:采用微波消解法对试样进行消解,分别通过ICP-MS法、HPLC/荧光法和3,3-二氨基联苯胺比色法3种方法测定了富硒蛹虫草菌丝体中硒的含量,对上述几种硒含量测定方法的工作条件、检出限和精确度进行了对比研究。实验结果表明:ICP-MS法、HPLC/荧光法和3,3-二氨基联苯胺比色法的检出限分别为0.2607、0.1821和10.4859μg/L,对同一样品以ICP-MS法测硒的标准差为最低,以3,3-二氨基联苯胺比色法测硒为最高。以ICP-MS 法实验结果为基准,当分析样品中硒含量很低时,可选用HPLC/荧光法和ICP-MS法,如分析样品含硒量相对较大,可采用3,3-二氨基联苯胺比色法。 关键词:蛹虫草;硒;ICP-MS;测定方法 中图分类号:O611.5 1引 言 蛹虫草为我国名贵中草药,是一类极具保健功能的大型药用真菌, 隶属于真菌界、真菌门、子囊菌亚门、核菌纲、肉座菌目、麦角菌科。它不仅含有多种活性物质,而且含有大量为人体所必需的微量元素,其中硒是人们最新发现的一种重要的微量元素,具有抗癌、抗疾病、抗衰老的作用;对砷、汞、镉等重金属有解毒作用;但是过量的硒又会引起中毒。 人们对硒产生了浓厚的兴趣,化学,环境和生物学家都在积极探索更好的测硒方法。我国科学家们,在上世纪八九十年代,就开始研究测定硒的方法,如王旗等在1992年,就运用气相色谱法测定硒元素[1];张权,李东辉等人,用催化动力学法测定硒(Ⅳ[2];郑衍生 彭茵, 用石墨炉原子吸收光谱法直接测定生物样品痕量硒[3];陈建华等人,还通过阳离子交换树脂分离-ICP 光谱法测定茶叶中微量硒[4]。荧光分光光度法作为国标法,在实际中应用很多,孙立波等(1997探讨了用高压液相结合荧光检测测定生物样品中硒的方法[5]。现在测硒方法日益成熟,国内外科学家大多使用氢化物-原子吸收光谱法HG-AAS[6,7,8]、氢化物-原子荧光光谱法HG-AFS[9]、石墨炉原子吸收光谱法GFAA[10],电感耦合等离子体-质谱 ICP-MS[11]等方法测定微量硒元素。由于含硒样品种类繁多,且每种测定方法都有其优缺点,所以根据不同的分析样品,选择合适的测定方法,有着非常重要的意义。 本文将蛹虫草进行液体深层富硒培养,采用微波消解法对富硒蛹虫草试样进行消解,选择三种不太常见的测硒方法,同时测定富硒蛹虫草中的硒含量,将结果进行了对比,探讨三种测硒方法的各自特点。 2.实验方法 2.1 仪器及试剂 微波消解仪;Waters高效液相色谱仪;荧光检测器;美国Agilent公司7500c型电感1本课题得到国家自然基金项目资助 硒标准储备液:500mg/L(国家环保总局标准样品研究所;优级纯浓硝酸和浓盐酸;分析纯EDTA;分析纯盐酸羟胺;分析纯3,3-二氨基联苯胺;色谱纯2,3-二氨基萘(sigma 公司;色谱纯环己烷;分析纯二甲苯;色谱纯乙腈。 2.2 样品的预处理 以本实验室得到的最佳富硒条件,发酵培养蛹虫草,过滤、洗涤并烘干,磨碎过40目筛。准确称取适量样品于干燥的聚四氟乙烯消解罐内,加入5mL硝酸,摇匀,密封,置入微波消解系统中,按照表1进行消解,将消解罐取出,冷却后打开,至于电热板(调至低温档上赶尽棕色烟雾,冷却,加入等体积的盐酸,加热至产生白烟为终点(ICP-MS法省略还原步骤,冷却后定容,转移至三角瓶中,待测定。 表1 微波消解工步程序 工步 时间(min 压力(Mpa 1 2 3 4 2 4 6 8 0.3 0.6 0.9 1.0 2.3 ICP-MS法测定硒含量 工作曲线的绘制:样品定量分析采用外标法,内标元素选用89Y。将硒标准储备液(400mg/L逐级稀释成硒标准溶液:0;10;50;200μg/L浓度,测定时采用样品与内标物同时进样,绘制标准曲线。 2.4 HPLC/荧光法测定硒含量 工作曲线的绘制:将硒标准储备液(400mg/L逐级稀释成1μg/mL硒标准溶液,分别取0, 0.2,1,2,3,4mL进行消化,于上述消化液中加入1mL EDTA(2%和2~4滴甲酚红指示剂摇匀,溶液应呈桃红色,用30%NaOH调至浅橙色,此时溶液pH值为1.5~ 2.0,再加入2.0mL 0.1% 2, 3-二氨基萘溶液摇匀,置沸水浴内加热5min,取出冷却。生成的4, 5-苯并苤硒脑用3. 0mL 环己烷萃出。取10μL注入高效液相色谱仪,以保留时间定性,峰面积外标定量