应用分子生物学与同位素示踪技术研究厌氧氨氧化菌活性及功.PDFVIP

　 　 　 　 　 第 卷第期 环境科学学报 ， ３１ ６ Ｖｏｌ．３１ Ｎｏ．６ 年月 ， ２０１１ ６ 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｊｕｎ． ２０１１ 叶磊，祝贵兵，伦中财，等．２０１１．应用分子生物学与同位素示踪技术研究厌氧氨氧化菌活性及功效［Ｊ］．环境科学学报，３１（６）：１２０６１２１１ ， ， ， Ｙｅ Ｌ Ｚｈｕ Ｇ Ｂ Ｌｕｎ Ｚ Ｃ ｅｔ ａｌ． ２０１１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｎａｍｍｏｘ ｂａｃｔｅｒｉａ ｔｏ Ｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｉｓｏｔｏｐｅ２ ａｎａｌｙｓｅｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ，３１（６）：１２０６１２１１ 应用分子生物学与同位素示踪技术研究厌氧氨氧化 菌活性及功效 ， ， ， １ ３ １  ２ １ ３ １ １ １ 叶磊，祝贵兵，伦中财，王朝旭，王衫允，冯晓娟，尹澄清 １． 中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室，北京１０００８５ 北京京城中水有限责任公司，北京 ２． １００１６４ ３． 中国科学院研究生院，北京１０００４９ 收稿日期：２０１００９１２　 　 　 修回日期：２０１０１１０４　 　 　 录用日期：２０１０１１０８ 摘要：厌氧氨氧化是一个新发现的氮循环途径，与反硝化作用都产生氮气，但准确衡量厌氧氨氧化活性及功效的相关方法还是个难题本研究． 联合应用分子生物学与同位素示踪技术，以北京某污水处理厂的活性污泥为实验样品，研究其中厌氧氨氧化菌的存在、活性和功效．厌氧氨氧 化菌的分子生物学分析是通过１６Ｓ ｒＲＮＡ进行，选择两步引物分别为ｐｌａ４６６３０ｒ 和Ａｍｘ３６８ｆＡｍｘ８２０ｒ进行巢式ＰＣＲ 扩增，并对１６Ｓ ｒＲＮＡ 进行 １５ １５ ＋ １５ ＋ １４ － １４ ＋ １５ － 后续基因处理． 同位素示踪技术是通过Ｎ标记，对反应体系进行３ 种处理：仅加ＮＨ ；加ＮＨ 和ＮＯ ；加ＮＨ 和ＮＯ ，模拟 ① ４ ② ４ ３ ③ ４ ３ 实验在 的厌氧密闭容器中进行，种处理条件下产物氮气的组成通过气相色谱同位素比值质谱仪进行分析，通过数据计算获得厌氧氨氧 １９℃ ３  化和反硝化反应的速率 研究结果表明被试活性污泥样品中存在污水处理工艺中常见的厌氧氨氧化菌种类——— ．１６Ｓ ｒ