冬虫夏草与虫草菌丝有效成分分析比较.docVIP

山西大学学报(自然科学版21(1:80~85,1998 Journal of Shanxi University(Nat.Sci.Ed. 冬虫夏草与虫草菌丝有效成分分析比较 沈晓云　　李兆兰　　田　军 (南京大学生物科学与技术系210093 摘要　对冬虫夏草及其无性型(T oly p ocladium sinens e C.L.L i.的虫草多糖。红外光谱、甘露糖、氨基酸、微量元素等作了分析和比较。发现二者成分比较近似,通过急性毒性实验A mes实验,微核实验表明虫草菌丝安全无毒。 关键词　冬虫夏草,　虫草菌丝,　虫草多糖,　甘露醇,　毒性实验 中图法分类号　O629,R28 　　从云南迪庆藏族自治州采集的冬虫夏草通过组织分离培养获得虫草无性型,经鉴定为中国弯颈霉(Tolyp ocladium sinense C.L.Li.[1],属于半知菌亚门从梗孢科弯颈霉属。用生物工程技术大量培养获得成功。该无性型在化学成分上与天然冬虫夏草近于一致。 该无性型经上海海军医学研究所采用多种免疫学指标检测。证明虫草菌丝与冬虫夏草均具有保护T淋巴细胞[2]激活单核一巨噬细胞系统的吞噬功能[3]以及抑制抗体形成细胞[4]的作用。虫草菌丝与天然虫草均具有免疫调节的作用,这为临床上治疗免疫功能低下或免疫功能紊乱疾病提供了科学依据。 用冬虫夏草和虫草菌丝水提液观察药物对移植性Lewis肺癌的抑瘤率,实验结果表明天然虫草组对移植性肺癌的抑瘤率为67%,而虫草菌丝组为66%。虫草菌丝与天然虫草均具有明显抑瘤作用。且二者药效无显著差异。为虫草菌丝制剂临床治疗肺癌的可能性提供了实验依据。 上海海军医学研究所应用该无性型制成虫草胶囊,对原发性血小板减少症进行临床治疗观察,服药三个月后,30例试服人员中,显效4例,有效21例,有效率为81.3%,对慢性阻塞性肺病进行临床疗效观察。服药三个月后,25例试服人员中,近控3例,显效6例,好转15例,无效1例,显效率36%,有效率96%。咳、痰、喘、呜四症均有不同程度改善[6]。 1　材料和方法 1.1　菌种来源 冬虫夏草样品来源于西藏产区。人工虫草菌丝由南京大学真菌生物工程实验室分离,学名为中国弯颈霉(Tolyp ocladium sinense C.L.Li.。 收稿日期:1997-08-18 1.2　培养基及培养条件 1.2.1　母种斜面培养基　马铃薯葡萄糖培养基、麦芽汁培养基。1.2.2　摇瓶及发酵罐培养基　蛋白胨葡萄糖培养基 1.2.3　培养条件 摇瓶培养26℃±2℃,摇瓶转速100~150r /min ,培养48h ,pH 自然。 发酵罐培养　罐温26℃±2℃,罐压0.3kg/cm 2~0.4kg/cm 2,通气量1:0.8v/v ,搅拌速度200r/min,发酵终点48h ~60h 。1.3　有效成分分析1.3.1　虫草多糖 1.3.1.1　虫草多糖提取　虫草菌粉热水抽提3h,抽提液浓缩至原体积1/5,浓缩液用95%乙醇沉淀,过滤,沉淀物即为虫草菌丝粗多糖,真空干燥,得虫草菌丝粗多糖粉末。冬虫夏草粗多糖提取方法同上。 1.3.1.2　虫草多糖含量测定　硫酸—蒽酮比色法。经测定的为纯多糖的含量。 1.3.1.3　虫草多糖红外光谱分析(IR　将冬虫夏草及虫草菌丝多糖粉末制成溴化钾压片在NICOEF —170SXFT 型红外吸收光谱仪上描记红外吸收光谱。 1.3.2　甘露醇　按中华人民共和国药典1977年版“甘露醇含量测定项[7] ”进行测定。 1.3.3　微量元素分析　称取冬虫夏草及虫草菌丝粉末各0.3g ,分别装入25ml 小杯中,加5ml 工艺超纯浓硝酸浸泡过夜,置于电热板上加热消化到颗粒状。加8滴优级纯高氯酸,继续加热至白烟冒尽,余下白色残渣用1%盐酸溶解,定容到5ml 待测,仪器为美国J —A 110063道真空型电感偶合等离子发射光谱仪(Inductively coupled plasma ,配用PDP 11/23计算机,PA —120终端。 1.3.4　氨基酸分析　取冬虫夏草及虫草菌丝粉末分别在6m ol/L HCl,5m ol/L NaOH 中水解,在日立835—50型氨基酸分析仪上分析。 1.4　急性经口毒性试验(LD 50　霍恩氏法　选用18g ~22g 健康NH 小鼠40只,禁食16h 后分雌雄按体重随机分成 2.15g /kg 、4.54g /kg 、10.0g/kg 、21.5g/kg 体重各四个剂量组,每组5只,以20m l /kg 体重的灌胃容量经口一次投予。受试后观察一周。 1.5　小鼠骨髓嗜多染细胞微核试验　选用22g ~30gNIH 健康小鼠50只。按体重随机分入雌雄各三个剂量组,一个阴性,一个阳性对照组,阳性对照组采用环磷酰胺腹腔一次注射。检品和阴性对照组用30小时两次灌胃法,