蛋白质芯片技术 (2).ppt

* Telechem International Inc ArrayIt 生物芯片的设想最早起始于80年代中期, 90年代美国Affymetrix公司实现了DNA探针分子的高密度集成,　这是一项融微电子、微机械、化学、物理、计算机技术等于一体,是生物学技术与其它学科相互交叉和渗透的产物. 生物芯片(B iochip)是指通过微电子、微加工技术在芯片表面构建的微型生物化学分析系统,以实现对细胞、DNA、蛋白质、组织、糖类及其他生物组分进行快速、敏感、高效的处理和分析 DNA芯片 与蛋白芯片最大的区别是靶分子和探针分子的结构差异 相对于DNA 芯片, 蛋白质芯片技术面临更多困难。第一, 相对于DNA 的碱基配对杂交机制, 蛋白质之间的相互作用呈现出更强的变化性。而且, 蛋白质的活性以及相互作用的性质可能需要其它蛋白质的作用和翻译后修饰。第二, 相对于PCR 技术这样可以大量扩增DNA 的技术, 尚未有可以大量扩增蛋白质的成熟技术。第三, 蛋白质的表达和纯化工作十分艰巨, 而且经常不能保持蛋白质的完整功能。最后, 许多蛋白质很不稳定, 给阵列制作本身带来很大的困难。 多数蛋白芯片通过接触印记合成，大于30 000 点的高密度阵列可以通过已有的DNA 的点样设备来实 点间距为4. 5mm,点的直径250um,可以检测250nmol或l0Pg的待测蛋白质 * 它以蛋白质检测目的物,蛋白质是基因表达的最终产物,因而它比基因芯片更进一步的接近生命活动的物质层面, 由于蛋白质芯片的探针蛋白特异性高、亲和力强,所以对生物样品的要求较低,故可简化样品的前处理,甚至可直接利用生物材料(血样、尿样、细胞及组织等)进行检测 同时,由于疾病的发生、发展与某些蛋白质的变化有关,所以利用蛋白质芯片还可直接筛选出与靶蛋白作用的化合物,从而大大推进药物的开发. 此外,蛋白质芯片有助于了解药物或毒物与其效应相关蛋白质的相互作用,从而促进药物学和毒理学研究的发展. 蛋白质芯片能同时检测生物样品中与某种疾病或环境因子损伤可能相关的全部蛋白质含量的变化情况即表型指纹,对监测疾病的进程和预后及判断治疗效果有重要意义. * 蛋白质芯片依照应用领域不同可分为两类: 蛋白质检测芯片和蛋白质功能芯片。 据检测方法不同可以进一步分为正相蛋白质检测芯片和反相蛋白质检测芯片 正相蛋白质检测芯片首先用不同的荧光标记物对样品中的拟研究的蛋白质进行标记, 再将这些样品在抗体微阵列上进行温育, 然后用生物芯片扫描仪检测各个阵列分子点上荧光信号。正相蛋白质检测芯片可以同时对同一样品的不同成分进行分析对比。但是需要注意在许多情况下, 蛋白质倾向于形成多蛋白质复合体, 所以如果出现很强的信号, 那么可能是由于蛋白质的浓度很高, 或是由于形成了大的蛋白质复合体。 反相蛋白质检测芯片 是用破碎的微量组织或者细胞样品点样制成的芯片, 代表在某种状态下整个细胞的蛋白质,然后用特定抗体进行检测。反相蛋白质检测芯片可以检测许多组织、细胞裂解液, 可以研究整个蛋白质组随时间的波动变化状态, 尤其是通路中的蛋白质何时被修饰、何时被激活。这种芯片检测的优点在于样品需要量小且不需要进行标记, 只需要检测抗体即可。然而它的缺点也在于此, 低点样量可能造成低丰度的蛋白质信号漏检 寻找与拟研究蛋白质相互作用的蛋白质、小分子, 或者寻找对蛋白质进行修饰的修饰酶, 以及寻找酶的底物等等 脂质体是由磷脂双层构成的具有水相内核的脂质微囊，目前脂质体已应用于研究蛋白质与生物膜的相互作用、生物膜中离子的转运、药物与膜受体作用、酶催化活性模拟、包载药物、基因转移等方面。 * 选择具有较高纯度和完好生物活性的蛋白进行溶解,保持在整个制作过程保持水合状态，维持生物活性 接触型点样仪适用于普通玻片, 喷射型点样仪适用于3D 表面和纳米井表面。使用电子喷雾贮存技术将干燥的蛋白质点样到有葡聚糖的表面, 可将点样直径从150 微米缩小到30 微米。 Gly 甘氨酸 光刻法主要是利用半导体持术,在合成碱基单体的5’- 羟基末端连接 上一个光敏保护基,利用光照射使羟基脱保护进行DNA的合成,在生长的链上加上一个碱基。 压电技术利用喷墨打印将毫微升积的试剂喷印到芯片的特定位点,利用电流将分子运送到固 相的表面,一个XYZ三维移动装置指导喷印头的定位。点样法则伪造与微阵列的直接表面接 触,利用由微点样针、毛细管或镊子组成的打印头将准备好的样品从样品槽中转移到固相的表 面。 * PVDF 聚二氟乙烯 lysine 赖氨酸 Aldehyde:醛, 乙醛 Avidin生物素 Ni-NTA 镍-硝基三乙酸（有两个开放的互补位 点可与组氨酸结合。 ） Nitrocellulose ]硝化纤维