免疫组织化学染色技术.PDFVIP

免疫组织化学染色技术 综合实验室李报 2014.4.2 提纲 一原 理 二组织材料的制备 三免疫组织化学检测方法 四染色过程 五结果判断 六染色失败的几种原因 一 原 理 一 原 理 通过免疫学中抗原抗体结合反应，用特异性 抗体（单克隆或多克隆）检测组织、细胞内相 应的抗原物质，形成抗原 — 抗体复合物；此 复合物上带有事先标记的标记物，通过与标记 物相对应的检测系统，如酶底物显色反应可使 之呈现某种颜色，从而可检测组织细胞内的抗 原，以达到诊断、鉴别诊断和研究的目的。 P物质 P物质 抗P物质抗体 抗P物质抗体 标记抗体 标记抗体 标记物 标记物 二组织材料的制备 一取材 二固定 三脱水 四包埋 五切片 六染色 组织材料的固定 （1）防止组织细胞的死后变化，防止自溶和 腐败，以保持组织细胞的固有形态。 （2）有效的保护抗原，防止降解丢失。 （3）固定剂兼有硬化作用、使组织硬化、 增加组织硬度、便于制片。（广口瓶） 固定液的选择： (1)甲醛固定液：10％福尔马林 (2)4%多聚甲醛固定液（难溶） (3)丙酮及醇类固定剂…… 固定时间： 固定时间要视组织块的厚薄，固定液的种 类及浓度，温度而定，原则上，组织块 大小与固定时间成正比，固定液的穿透 力及浓度与固定时间成反比。 固定时注意事项： 1 2 3 新鲜，动物死后 组织块不宜过大 固定剂的量要超 半小时内固定， 过厚，2㎝×宽 过组织的20倍体 最迟不得超过2 1.5㎝×厚0.3㎝ 积。 小时。 。 组织脱水(脱水机)和石蜡包埋 75％乙醇、85％乙醇、95％醇Ⅰ、无 水乙醇Ⅰ 、Ⅱ和Ⅲ ，二甲苯Ⅰ、Ⅱ 和Ⅲ，石蜡Ⅰ 、Ⅱ和Ⅲ 。 切片： 石蜡切片：3～5μm、烤片 冰冻切片： (1)冰冻切片分固定和新鲜组织，固定 组织需经庶糖处理，冰冻切片。 (2)冰冻切片后需立即固定 (3)冰冻切片固定后-80℃保存备用 三免疫组织化学检测方法 荧光标记免疫组织化学 酶联免疫组织化学 胶体金等 抗体(一抗)的选择 种属特异性 单抗，多抗 公司（进口，国产） 工作液 直接法 将酶直接标记在抗体上，再用标记抗体与 样品中的抗原直接结合 。 该方法操作简便，但敏感性不及间接法。 间接法 将分离的抗体（第一抗体简称一抗）作 为抗原免疫另一只动物，制备该抗体的抗体