HPV16E7蛋白CTLs抗原肽的病毒样颗粒治疗性疫苗的构建.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（２）：４５５１ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 技术与方法 檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 基于ＨＰＶ１６Ｅ７蛋白ＣＴＬｓ抗原肽的病毒样颗粒 治疗性疫苗的构建 １，２，３ １，２，３ １，２，３ １，２，３ １，２，３ １，２，３ 褚晓杰 　李　杨 　龙　琼 　姚宇峰 　孙文佳 　黄惟巍 １，２，３ １，２，３ １，２，３ 　杨　旭 　刘存宝 　马雁冰 （１中国医学科学院／北京协和医学院 医学生物学研究所　昆明　６５０１１８　２云南省重大传染病疫苗研发重点实验室　昆明　６５０１１８） （３云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心　昆明　６５０１１８） 摘要　目的：构建呈递ＨＰＶ１６Ｅ７ＣＴＬｓ抗原表位的病毒样颗粒，并初步评价病毒样颗粒作为治疗 性疫苗载体的潜能。方法：根据文献选择有效的ＨＰＶ１６Ｅ７ＣＴＬｓ表位，合成其正负链寡核苷酸序 列，并通过退火形成双链 ＤＮＡ片段。将片段克隆于表达乙肝核心抗原的重组质粒 ｐＴｈｉｏＨｉｓＡ ＨＢｃＡｇ，使抗原肽得以呈现于病毒样颗粒。重组菌经ＩＰＴＧ诱导后经ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定目的蛋白表 达。菌体破碎后经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心进行纯化，并经高效液相凝胶过滤色谱和 电镜鉴定病毒样颗粒的存在。制备的病毒样颗粒免疫接种了ＴＣ１细胞的肿瘤模型小鼠，检测小 鼠肿瘤大小。此外，在体外以抗原肽刺激脾细胞，以ＥＬＩＳＡ检测ＩＦＮ表达水平。结果：构建的 γ 三个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建正确。表达的重组蛋白大小与预期相符，并 形成了病毒样颗粒。免疫小鼠后显示了抑制肿瘤增长的一定作用趋势。此外，抗原肽体外刺激 促进了疫苗免疫小鼠脾细胞ＩＦＮ的表达，显示疫苗引起机体产生Ｅ７特异性的细胞免疫应答。 γ 结论：ＨＢｃＡｇＶＬＰｓ是有潜能的治疗性疫苗载体。 关键词　病毒样颗粒　治疗性疫苗　人乳头瘤病毒 中图分类号　Ｒ３９２．１１ 　　宫颈癌是危害妇女健康最为严重的疾病之一，在 ＨＰＶ中，１６、１８型与７０％的宫颈癌相关，而１６型与超过 女性肿瘤发病率中占第二位。在全世界范围内，每年 ５０％的宫颈癌相关。国际上已商业化的预防性ＨＰＶ疫 ［１］ 苗对于已经建立的ＨＰＶ感染或肿瘤，没有明显治疗作 大约有４９．３万个新发病例和２７．４万个死亡病例 ，我 国宫颈癌患者以每年 １４万人的速度增长，死亡人数在 用。由于其价格昂贵等原因造成目前疫苗接种率还很 ５万左右。而在所有的宫颈癌病例中几乎都可检测到 低；现有疫苗无法对其它约３０％的宫颈癌起到预防保护； ＨＰＶ的存在。ＨＰＶ感染还引起肛门癌，外阴癌，阴道 宫颈筛查普及率低等，这些因素造成ＨＰＶ感染引起的宫 ［２］ 颈癌前病变（ＣＩＮ）及宫颈癌发病率仍然很高。因此，研 癌和阴茎癌 ，此外，ＨＰＶ感染也是头颈癌等非生殖道 癌发生的重要原因。现在已经明确高危型ＨＰＶ的持续 制治疗性ＨＰＶ疫苗，针对癌前病变和肿瘤进行免疫治 感染是宫颈癌发生和存在的必要因素。而在高危型 疗，具有对ＨＰＶ相关疾病治疗控制的广阔应用前景。 　　研究表明，ＨＰＶ的早期蛋白Ｅ６和Ｅ７在Ｈ