生物化学 第三章 酶.ppt

第三章 酶 第一节 酶的概述 第二节 酶的命名及分类 第三节 酶的作用机理第 四节 酶促反应动力学 第五节 生物体内重要的调节酶 第六节 酶的分离纯化与酶活力测定 第七节 酶工程与酶的应用 胰凝乳蛋白酶的活性中心 消化道内几种蛋白酶的专一性 酶专一性的“诱导契合学说” “诱导契合” 示意图 胰凝乳蛋白酶的活性中心 胰凝乳蛋白酶反应的详细机制（1） 胰凝乳蛋白酶反应的详细机制（2） 抑制作用的类型 非专一性不可逆抑制 不可逆抑制作用 专一性不可逆抑制 抑制作用 竞争性抑制 可逆抑制作用 非竞争性抑制 反竞争性抑制 ⑴ 竞争性抑制剂多是酶的底物类似物或反应产物； ⑵ 抑制剂与底物竞争与酶结合（结合部位相同），多与酶的活性中心同底物相结合的基团结合。 ⑶ 底物浓度增加时, 抑制作用减弱, 取决于底物浓度与抑制剂浓度的比例及其与酶的亲和力的大小, 可以通过加大底物浓度的方法消除抑制作用。 ⑷ 动力学参数：Km值增大，Vm值不变。 底物浓度越大，受影响越小。 抑制剂浓度大，受抑制程度； 与EI、ES的稳定性有关； 可逆抑制剂（底物的类似物） 非竞争性抑制的作用模式图 反竞争性抑制的作用模式图 ⑴ 反竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的分子结构类似； ⑵ 抑制剂与底物可同时与酶的不同部位结合； ⑶ 必须有底物存在，抑制剂才能对酶产生抑制作用；抑制程度随底物浓度的增加而增加； ⑷ 动力学参数：Km减小，Vm降低。 不可逆抑制作用 可逆抑制作用 竞争性抑制： Km增大，Vm不变 非竞争性抑制： Km不变，Vm降低 反竞争性抑制： Km减小，Vm降低 别构酶的齐变模型 别构酶的序变模型 非竞争性抑制的特点： ①抑制剂与底物没有结构相似的关系，两者没有竞争，底物与抑制剂同时在酶的不同部位与酶结合， ②生成抑制剂-酶-底物三者的复合物（IES），不能进一步分解为产物，从而降低了酶活性。 ③底物和非竞争性抑制剂在与酶分子结合时，互不排斥，无竞争性，因而不能用增加底物浓度的方法来消除这种抑制作用。 ④动力学参数：Km值不变，Vm值降低。 3．反竞争性抑制 反竞争性抑制是指酶只有与底物结合后才能与抑制剂结合生成IES复合物，但IES不能分解形成产物（图3-26）。 图3-26 反竞争性抑制剂与酶的结合 存在下列平衡： 这类抑制作用与酶结合形成的中间产物只有ES和IES，因此： [E] = [Ef] + [ES] + [IES] + + E S ES ESI E P 经过推导后，得到： Vm [S] · ? = Km 1 + [ I ] Ki 1 + [ I ] Ki + [S] v 双倒数方程： 图3-27 反竞争性抑制动力学图 反竞争性抑制的特点： 抑制剂对酶促反应的影响小结： （2）有机砷化合物： 这类化合物与酶分子中半胱氨酸残基作用，抑制含有巯基酶的活性。 如路易斯毒气,与酶的巯基结合而使人畜中毒。二巯基丙醇和二巯基丁二酸钠等含巯基的化合物可使酶复活。 路易士气 巯基酶 失活的酶 酸 （3）烷基化试剂：这类试剂通常含一个活泼的卤素原子，如碘乙酸、碘乙酰胺和2，4-二硝基氟苯等，可以与酶分子的巯基、氨基、羧基和咪唑基等进行反应。如与含巯基的酶作用： （4）重金属盐：某些重金属离子（Pb2+、Cu2+、Hg2+）能与生理pH条件下带负电荷的酶分子进行不可逆结合，从而使酶的活性被抑制。 （5）氰化物、硫化物、CO：可与含铁卟啉的酶（细胞色素氧化酶）中的Fe3+结合，使酶失活。 2．专一性的不可逆抑制作用 指抑制剂专一地作用于某一种酶活性部位的必需基团而导致酶的失活，它是研究酶活性部位的重要试剂。 一些专一性不可逆抑制剂在与酶作用时，通过酶的催化作用，其中某一基团被活化，使抑制剂与酶发生共价结合从而抑制了酶的活性，如同酶的自杀，此类抑制剂称为自杀性底物 例如β-卤代-D-Ala（丙氨酸）是细菌中丙氨酸消旋酶（alanine racemase，AR）的不可逆抑制剂，为磷酸吡哆醛酶类的自杀性底物。AR能将L-Ala转变成为D-Ala，而 D-Ala是细菌细胞壁肽聚糖的重要原料，AR受到抑制后可以阻断肽聚糖的合成，从而抑制细菌的生长，因此，β-卤代-D-Ala是一种抗菌药物。 （二）可逆的抑制作