自身免疫性疾病免疫学检验.ppt

抗核小体抗体（anti-nucleosome antibody，AnuA) 是细胞核染色质的基本单位; 细胞凋亡而致核小体大量蓄积， 诱导B细胞产生的AnuA是SLE 特异性的标志抗体。 抗dsDNA抗体 抗核小体抗体 抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性 率为60%～80%，特异性＞97%。 抗核小体抗体 常见AID的ANA阳性检出率 疾病 ANA（%） 疾病 ANA（%） SLE ≥95 SS 70～80 MCTD ≥95 PM/DM 30 PSS 85～95 RA 20～30 （二）ANA的检测方法 将患者血清先进行稀释，可以做定量试验，在1:80 稀释仍呈阳性时，对SLE的诊断有较大的参考价值。 形成胞核基质—ANA—抗人Ig · FITC 1.荧光免疫法 抗核抗体核型与相关疾病 核型 荧光图形 抗体 相关疾病 周边型 核周环状荧光 抗dsDNA SLE、慢活肝炎 均质型 核呈均质荧光 抗DNA、AHA、 AnuA SLE、RA、PSS、慢性肝病 斑点型 核内颗粒状荧光 抗ENA MCTD、SLE、PSS、SS、PM 核仁型 核仁有荧光 抗核仁抗体 PSS、雷诺现象、SLE 着丝点型 核浆细小相同颗粒荧光 抗着丝点 PSS、CREST综合征 均质型 抗核抗体核型 着丝点型 核仁型 斑点型 例：间接免疫荧光法（IIF法） 测定抗dsDNA抗体 短膜虫的动基体内含有大量纯的 dsDNA，无其他抗原干扰，可用 作基质来测定抗dsDNA抗体。 短膜虫替换小鼠肝切片或肝印片或 Hep2，制成抗原基质—抗dsDNA—抗人IgG · FITC, 阳性结果可见鞭毛一端的动基体显示清晰的荧光。 测定抗dsDNA抗体具有特异性强、敏感性高的优点。 用ELISA间接法检测抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体。 2. ELISA法 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 待检血清 按分子大小分开不同区带 分离 转印 NC膜上 抗ENA与膜上相应抗原带结合 抗人IgG·HRP NC—ENA—抗ENA—抗人IgG·HRP—显色 3. IBT法 类风湿因子(rheumatoid factor,RF): 是抗变性IgG的 自身抗体，为19S的IgM，也可见7S的IgG和IgA。 与人变性IgG结合，不与正常IgG发生凝集反应。 RF出现在类风湿性关节炎（RA）患者中，约70%～ 90%的血清中和约60%的滑膜液中可检出IgG类RF； 二、类风湿因子测定 IgG类抗体与相应抗原结合后，即发生变性； 在炎症过程中也可发生IgG变性，构成自身抗 原，刺激免疫系统产生各种抗IgG抗体； 滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结合形成中等 大小的IC，比血清中IgM类RF更易致病。 （一）RF检测方法 1 RF检测最常采用的试验方法。 将IgG吸附在聚苯乙烯胶乳颗粒上作为诊断试剂，与待检血清中的RF结合，出现胶乳凝集颗粒。但此法的灵敏度和特异性均不高，而且只能检出血清中的IgM类RF。 间接胶乳凝集试验 2 将待检血清稀释成一定浓度，再加入定量变性IgG诊断试剂，立即用透射比浊或速率散射比浊仪测定血清中的RF。此法具有速度快、敏感性高（达ng/L水平）、精密度高（CV<5%）、稳定性好、能定量分析的优点，但仍局限在IgM类RF的检测。 免疫比浊法 3 IgM、IgG和IgA类RF需要用RIA法或ELISA法等方法检测，但前者有放射性污染，故临床上多采用ELISA间接法或双抗原夹心法进行测定。 ELISA法 （二）临床应用 常见AID的RF阳性检出率 疾病 RF（%） 疾病 RF（%） 干燥综合征 95 结节性多动脉炎 50 类风湿 70～90 系统性红斑狼疮 30 硬皮病/皮肌炎 80 混合性结缔组织病 25 RF在诊断RA患者时并非特异的，也非唯一标准。 慢性活动性肝炎及老年人均可有不同程度的阳性率。 三、其他自身抗体测定 自身抗体的类型、检测方法及临床意义 自身抗体类型 检测方法 临床意义 抗甲状腺球蛋白抗体(A-TG) 荧光免疫法、ELISA、RIA 桥本甲状腺炎 抗甲状腺过氧化物酶抗体,) ELISA Graves 病,桥本甲状腺炎 抗乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab) ELISA、RIA 重症肌无力 抗平滑肌抗体(SMA) 荧光免疫法、ELISA、RIA 自身免疫性肝炎,慢性活动性肝炎, 原发性胆汁性肝硬化 抗线粒体抗体(AMA) 荧光免疫法、ELISA、RIA RA,SS,SLE,原发性胆汁性肝硬化, 慢性活动性肝炎,持续性肝阻塞 抗胃壁细胞抗体 荧光免疫法 恶性贫血 抗