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免疫磁珠分离技术 磁珠分离技术 一、原理 免疫磁珠法分离细胞基于细胞表面抗原能与连接在磁珠上的特异性单抗相结合，在外磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与相连着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。免疫磁珠法分正选法和负选法，也称阳性分选法和阴性分选法。正选法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞；负选法-磁珠结合的细胞为不需要细胞。一般负选法分选较为常见，因为此方法获得的所需要的细胞表面不含有抗体及磁珠的干扰。现以两步法分选小鼠 CD4 CD25 T 细胞的分选为例分别介绍负选法、正选法如下。 1、材料试剂： 、生物素化的，小鼠 CD4 阴性分选抗体混合物cocktail，内含抗 B 细胞（CD45R，B220）、CD8T 细胞（CD8a，Ly-2）、造血细胞（CD11bMac-1），NK 细胞（CD49bDX5）等非 CD4T 细胞表面标志的抗体。 、结合有磁珠的抗生物素抗体（Scimall 科学在线提供）；含 0.5BSA（或0.5FCS）及 2mmol/L EDTA 的 PBS 缓冲液；抗小鼠 CD25-PE 抗体；结合有磁珠的抗 PE 抗体（Scimall 科学在线提供）；磁珠分离器或分离柱。 2、实验步骤 、负性分选小鼠 CD4T 细胞 、阳性分选小鼠 CD25 T 细胞二、注意事项： 1、如果分离细胞用作培养，全过程注意无菌操作。 2、磁珠分离系统分离的细胞 纯度可以达到 80-99，得率在 60-90左右，仅次于或相当于流式细胞仪的分选效率，与 FACS 相比，MACS 设备简单，耗时极短，故而应用广泛。设定不同的程序（细胞得率或纯度不可兼得），连续两次过柱分选可进一步提高分选细胞纯度，通常可达到 95-95。 3、由于阳性分选得到的细胞表面结合有抗体及磁珠，有可能影响细胞的功能，故目前常用阴性分选的方法分离细胞。如果只能用阳性分离的方法，Scimall 科学在线建议在分离后培养 1-2 天，使结合在细胞表面的抗体脱落。 4、抗体包被磁珠对死细胞、红细胞常有非特异性结合。故而分选前去除死细胞、红细胞（如通过 Ficoll 分离去除）可以提高分离的效果。 三、阳性分选法和阴性分选法的优缺点比较sXhL5znEeYy8Tt3NnIiCcWx7Rr1Lm GgAbVv5Pp0 KkEeZz9Tt3No-IiCdXx7RrFtXhL NnHiCcWw7Rr1LlGgAaVv 5PpKkEeYz9 Tt3No-IiCdXx7Rr2MmGgB bVv5Qq0KkFf Zz9Tu4Oo-IjoScG0uYi w6Qq0Ll FfZAaUu4Op JjDeYy8Ss3N nHhCcWw6Rr 1LlGgAaUv5N7BN7B pTdH1vZjbN7B pTdH1v Zj N7BpTdH1 CqUeI2w kO80KkEeZz9Tt3 No-IiCdXx7R r2MmGgBbVv5Qq0KkFfZz9 Tu4Oo-IjDdX x8Ss2MmHhBbWw6Qq0LlFf ZAaUu4OpJj DeYy8Ss3NnHhCcWw6Rr1Ll GgAaUv5Pp JkEeY w6Qq0LlFfZAaUu4O pJjDeYy8Ss 3NnHhCcWw6Rr1LlGgAaU v5PpJkEeYy 9Tt3Nn-IiCcXx7Rr1MmGg DdYy8Ss2NnH hBcWw6Qq1LlFfAaUu4Pp JjEeYy8St3N nHiCcWw7Rr1LlGgAaVv5 PpKkEeYz9T t3No-IiCdXx 7Rr2MmGgBb Vv5Qq0KkFfZ z9Tu4Oo-IjDdXx8Ss2MmHh BbWw6Qq0Ll FfZAaUu4OpJjDeYy8Ss3Nn HhCcWw6Rr1RbFtXhL6A3Nn-IiCcXx7 Rr1MmGgBbVv5Pq0KkEfZz 9Tt4Oo-IiDd Xx7Ss2MmHh BbVv6Qq0KkFpTdH1vZj N7BpTdH1vZjN7B pTdH1vpTdH1vZj N7B pTdH1vZj N7BpTdH 1vZj N7BpTdH HhCcWw6Rr1L lGgAaUv5Pp JkEeYy9Tt3 Nn-IiCcXx7R r1MmGgBbVv 5Pq0KkEfZz9 Tt4Oo-IiDdX x7Ss2MmHhB bVw6Qq0KlFf ZzaUu4OoJj DdYy8Ss2NnH hCcWw6Qr1Ll FgAaUu5Pp JjEeYy8Tt3N nIiCcWx7Rr aUv5PpJkEe Yy9Tt3Nn-Ii CcXx7Rr1MmG gBbVv5Pq0Kk EfZz9Tt4Oo- z9Tu4Oo-IjD dX