Module 5 相对定量： ΔΔCT法和相对标准曲线法.pdfVIP

Module 5 相对定量相对定量：：∆∆CT法和相对标准曲线法法和相对标准曲线法 相对定量相对定量：： 法和相对标准曲线法法和相对标准曲线法 定量定量定量定量 PCR:PCR: 相对基因表达量相对基因表达量相对基因表达量相对基因表达量 定量定量定量定量 相对基因表达量相对基因表达量相对基因表达量相对基因表达量 2 示例实验示例实验 示例实验示例实验 未处理未处理 样本样本 处理后处理后 样本样本 目的基因: Plat1 问题:样本处理后，Plat1基因的表达量有什么变化? 3 示例实验示例实验 示例实验示例实验 未处理未处理 样本样本 处理后处理后 样本样本 目的基因: Plat1 问题:样本处理后，Plat1基因的表达量有什么变化? 4 实验实验流程流程 实验实验流程流程 对照样本对照样本 对照样本对照样本 timetime t=0 t=12 t=24 t=48 total RNA total RNA total RNA total RNA cDNA cDNA cDNA cDNA 5 目的基因与目的基因与目的基因目的基因的比较的比较 目的基因与目的基因与目的基因目的基因的比较的比较 ∆Rn ∆Ct = 24 – 23 = 1 Ct = 24 Cycles Ct =23 未处理组目的基因 2-∆Ct =1/2 处理组 目的基因 6 如果加入如果加入内参基因内参基因会怎样呢会怎样呢?? 如果加入如果加入内参基因内参基因会怎样呢会怎样呢?? ∆Rn ∆∆Ct = 24Ct = 24 –– 14 =14 = 1010 ∆Ct = 23 – 13 = 10 Ct =14 Ct = 24 Cycles Ct = 13 Ct = 23 未处理组目的基因和内参基因 2- ∆ ∆ Ct =1 处理组目的基因和内参基因 7 两种相对定量的方法两种相对定量的方法 两种相对定量的方法两种相对定量的方法 比较 Ct 相对标准曲线法 (Ct) 法 样本间的倍数关系样本间的倍数关系样本间的倍数关系样本间的倍数关系 样本间的倍数关系样本间的倍数关系样本间的倍数关系样本间的倍数关系 8 两种方法的区别两种方法的区别??