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蛋白酶专一性酶切位点的影响因素分析 摘要：牛物活性肽(bioactive peptides)是貝有特殊纶理功能的肽。酶法水解蛋口质广泛用于 制备生物活性肽，但酶解法存在冃标肽得率低、副产物过多的缺点。蛋白酚和蛋白质的选择 是关键步骤，局部构彖、三维结构、实验条件以及苴它偶然因素也会影响蛋白水解酶的酚切 效果。木文综述了温度、pH值、温度和pH值共同作用、金属离子对酶切位点的影响，旨 在为研究酶切规律、制备高得率活性肽提供理论基础。 关键词：牛物活性肽；蛋口酶；水解条件；酶切位点 Influencing Factors Analysis of Protease Specific Cleavage Sites Abstract： Bioactive peptides are fragments with specific amino acid sequences that exert a positive physiological influence on the body. Many reported Bioactive peptides are produced by enzymatic hydrolysis,but there are disadvantages of by-product and low yield.The choice of protease and protein source is a key step,and many factors such as local conformation,tertiary structure, experimental conditions and causal interference can influence the protease hydyolysis.This article presents the influencing fators,temperature,pH values,temperature combined pH values and metal ions included,to provide theoretical basis for enzymatic law analysis and higher yield bioactive peptides production. Key words：bioactive peptides;protease;hydrolysis conditions;protease cleavage sites 1.前言 生物活性肽(bioactive peptides)是具有特殊生理功能的肽，是氨基酸以不同组 成和排列方式构成的不同肽类的总称(氨基酸数目一般小于100)o生物活性肽 有的是天然存在的，如谷胱甘肽、催产素、加压素、舒缓激肽、部分抗菌肽等， 有的牛物活性肽是以非活性的状态存在于某些蛋口质中，当用特定的蛋口酶水解 后被释放岀来，才成为冇特定生理活性的肽。同种蛋白质经不同的蛋白酶酶解后， 可以产生具有不同氨基酸序列、不同生理功能的生物活性肽，如大豆蛋口、卵清 白蛋白、牛乳蛋白、酩蛋白经不同的蛋白酶酶解可以产生具有降血压、抗氧化、 防病、祛病、增强人体免疫力、促消化吸收等不同生理作用的肽⑴。由于生物活 性肽在约物、保健品等领域具有广阔的应用前景，因此对生物活性肽的研究与开 发具冇重要意义。 2.生物活性肽的制备 为了研究生物活性肽的结构与功能，开发相关药物或保健品等，需大量制备 生物活性肽。目前，获得生物活性肽的主要途径有以下3利-①直接分离提取； ②化学合成或重组DNA技术；③体外水解蛋白质⑴。 大然生物活性肽分布很广泛，目前已经从动物、植物、微生物及部分海洋生 物中直接分离出多种生物活性肽。天然生物活性肽通常具有高效、低毒、无污染 等特点⑵。化学合成法有固相与液相两种方式，其基木原理几乎-样。化学合成 法发展较早，也比较成熟。重组DNA法一旦建立好系统，就可以大量地重复性 生产所要的活性肽。然而，这些制备方法存在一定的局限性。生物活性肽在生物 体内的含量一般是微量的，如谷胱甘肽、催产素等，而且目前从大然生物体中分 离纯化获得活性肽的工艺还不是很完善。化学法合成仍冇许多缺点，包括①消旋 化现象；②侧链官能团需要保护；③整体效率低；④使用大量的有毒溶剂，且成 本高昂。因此化学合成法多半用在实验室，或是高价肽的生产上。重组DNA技 术在基因的表达与产品回收上仍冇问题，同时该法生产的活性肽种类也冇限制， 不能生产酰胺肽，也不适合制备短链肽⑶。 酶法水解曲于反应较温和、对蛋白质营养价值破坏小、使用的试剂毒性较低、 反应具有空间立体性、产物没有消旋化现象、反应位点具有方向性、无异味等优 越性，在现阶段被