山东大学研究生国家CR基本原理与应用.pptVIP

TaqMan 荧光探针的缺点 采用荧光淬灭及双末端标记技术，因此淬灭难以彻底，本底较高。 采用酶外切活性，因此定量时受酶性能影响。 探针标记成本较高，不便普及应用。 （2）分子信标探针 在探针的两末端分别标记荧光基团和淬灭基团，与TaqMan探针不同的是，该探针5’和3’末端自身可形成8个碱基左右的发卡结构，此时荧光分子和淬灭分子邻近，因此不会产生荧光。 当溶液中有特异模板时，该探针与模板杂交，从而破坏了探针的发卡结构，溶液便产生荧光，荧光的强度与溶液中探针的量成正比，因此可用于PCR定量分析。分子信标技术结合不同荧光标记可用于基因多突变位点同时分析。 （3）Lightcycler 双探针 由Roche公司开发的一种新的PCR定量技术 该技术的特点也是将荧光分子和淬灭分子分别标记在两个不同的探针上，产生荧光探针和淬灭探针，荧光探针的3’端连接荧光基团；淬灭探针的5’端连接淬灭基团。由于两探针设计时可与模板同一条链相邻的序列杂交，杂交时两探针的荧光基团和淬灭基团紧密相邻形成发夹结构而使荧光淬灭。荧光淬灭的程度与起始模板的量成正比，以此可以进行PCR定量分析。 该方法的特点是淬灭效率高，但由于两个探针结合于模板上因此影响扩增效率，此外由于需要合成两个较长的探针，因此合成成本相对较高。 （4）SYBR荧光染料 在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料；SYBR荧