常用分子生物.PDF

第21章 常用分子生物学技术的 原理及应用 The Principle and Application of Common Used Techniques in Molecular Biology 第一节 分子杂交与印迹技 术Molecular Hybridization and Blotting Technique 一、分子杂交与印迹技术的原理 核酸分子杂交(nucleic acid hybridization) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链 分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一 起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形 成杂化双链(heteroduplex) 。 复性 RNA DNA （一）印迹技术 利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子 转移到NC等各种膜上，使之成为固相化分子。 这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹，因 此称之为“blotting”，译为印迹技术。 （二）探针技术 用放射性核素、生物素或荧光染料标记其 末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为 “探针”，探针可以与固定在NC膜上的核苷酸 结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 二、印迹技术的类别及应用 （一）DNA印迹(Southern Blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。 （二）RNA印迹 (Northern Blotting) 用于RNA的定性定量分析。 （三）蛋白质的印迹(Western Blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究。 其他： 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip) 三 种 印 迹 技 术 的 比 较 ② ③ ① 分子杂交实验 放 射 自 显 影 照 片 第二节 聚合酶链反 应Polymerase Chain Reaction 一、PCR技术的工作原理 Template DNA 5 Primer 1 5 5 5 Primer 2 Cycle 1 5 5 5 5