生物大分子色谱分离和纯化.pptVIP

成本和分离条件的选择 E=P/t E为经济效益；P为利润；t为一次分离和纯化所需的时间 第四节 蛋白的色谱复性及同时纯化 作为高效分离手段之一的LC是纯化蛋白质的一种最有效方法，已成为基因重组蛋白质纯化必不可少的手段。 一、各种液相色谱的蛋白质复性方法 LC法进行蛋白质复性的优点是： 1、进样后可很快除去变性剂 2、色谱对于蛋白质分子的吸附，提高了复性的质量和回收率 3、复性同时达到纯化目的 4、便于回收变性剂，以降低废水处理成本 1、 SEC---空间排阻色谱或尺寸排阻色谱（Size Exclusion Chromatography） 该法的复性机理为： 在变性蛋白进入柱顶端时，因有高浓度变性剂的存在，变性蛋白质分子有一个随机的构象状态和大的动力学水和半径，不能进入柱的空隙，蛋白质在SEC柱上不保留。当受到复性的缓冲溶液洗脱时，因其逐步取代变性剂并使蛋白质浓度降低，使变性蛋白质分子处于热力学不稳定的高能状态，这些蛋白质分子就会自发地向热力学稳定的低能态-即蛋白质的天然状态转化，从而使变性蛋白质开始复性。 此时，局部复性的蛋白质可以进入球的内部，开始在液-固两相间进行分配，随着时间的推移，当蛋白质分子的结构变得更加紧密时，蛋白质在两相中的分配系数会逐步增加。当蛋白质进入柱填料的空隙后，其扩散速度缓解，从而限制了蛋白质的聚集，这样就减少了沉淀的产生。 蛋白质分子大