气相色谱质谱联用的原理及应用培训讲学.pptVIP

气相色谱质谱联用的原理及应用 李自丹 2010207449 主要内容 1 气质联用的原理 2常见的气质联用仪器及色谱柱 3样品处理 4气质联用参数设置 5气质联用对本课题组的意义 气质联用的原理 气相色谱是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。实际为通过样品组份沸点之间的差异先后进柱，然后在气体流动相和固定相之间分配系数的差异进一步分离。 质谱作为气相色谱的检测器，利用电离源将各种成分分子电离成质谱碎片，通过相应的谱库检索碎片信息，给出此信息与某化学物质匹配度，达到对物质进行定性的目的。 气质联用组成构建 6890N/5973C 色谱柱 常用的色谱柱包括毛细管柱和填充柱。 毛细管柱的参数及选择原则 内径：0.25mm 最常用的内径规格。有较高的柱效，负荷量较低，必须分流进样或无分流进样。用于复杂多组份样品分析。 大口径，多固定相大样品容量，分离能力降低，流失较大。 柱长：25—30m 中长柱：分离10—50个组份的样品。 ????50m 长柱：分离大于50个组份或包含有难分离物质对的复杂样品。 加倍柱长，恒温分析时间则加倍但峰分辨率仅增大40%。如果分析只是比较好但不是特别好的，有比增加柱长度更好的办法来分析结果，如考虑更薄的膜，优化载气流量或用程序升温等。 膜厚：?0.25—0.33um 标准液厚 一般商品柱的标准液膜。对于流出达300℃的大多数样品（包括蜡、甘油三酯、甾族化合物等）能够很好的分析。 毛细管固定液 毛细管柱的固定液选择原则---“相似相溶” a. 非极性物质—非极性固定液。沸点越低的组分越早出峰。 b. 极性物质—极性固定液。极性越小的组分出越早出峰。 c. 极性与非极性混合物—极性固定液。极性越小的组分出越早出峰。 d. 易形成氢键物质—极性或氢键型固定液。不易形成氢键的组分先出峰，易形成氢键的组分后出峰。 e. 复杂难分离样品—多种固定液混合。 常用毛细管柱固定液 样品的处理 样品要求溶解在有机溶剂（如丙酮、正己烷、氯仿、苯等）中；溶剂应具有较低的沸点，从而使其容易与样品分离。尽可能避免用水、二氯甲烷和甲醇做溶剂，因为它们对延长色谱柱的使用寿命不利。另外，如果用毛细管柱分析，应注意样品的浓度不要太高，以免造成柱超载，通常样品的浓度为mg/ml级或更低。 样品中不能含有水，盐类等物质； GC所能直接分离的样品应是可挥发的、且是热稳定的，沸点一般不超过500℃，分子量小于500； 样品含量在ppb-ppm级，样品不得少于20 uL； 需要进行衍生化处理的样品，需合理选择衍生化方法。 样品的衍生化 衍生化目的：改善待测物质的气相色谱性质、热稳定性、分子质量、质谱行为，引入卤素原子或吸电子基团，通过一些特殊的衍生化方法可以拆分一些难分离的手性化合物。 常用的衍生化方法： 硅烷化衍生化 （1）BSTFA和BTA衍生化胺基和羟基 （2）MTBSTFA常用于药物、类固醇类检测 （3）MSTFA是最常用的硅烷化试剂（苹果酸、富马酸、柠檬酸等） （4）单糖硅烷化时用一般用三甲基硅烷咪唑（甘露糖、半乳糖、海藻糖等） 酰化衍生化 （1）乙酰化（体内药物筛选，大多数的临床药物） （2）三氟乙酰化/五氟丙酰化/七氟丁酰化（苯丙胺类和麻黄碱类） 烷基化衍生化（农药和杀虫剂） 气质联用参数设置 ----进样方式 动进样（auto-injector）和手动进样； 自动进样包括填充柱进样口、毛细柱分流/无分流进样口、冷柱头进样、程序升温（PTV）进样口、大体积进样、阀进样。 是否分流？ 分流（split） 主要组分分析；脉冲分流（pulse split）允许更大进样量； 不分流（splitless） 痕量组分分析；脉冲组分不分流（pulse splitless）允许更大进样量。 良好的分流比可以防止柱内某些成分含量过高，造成柱超载形成拖尾峰影响分离，使出峰时间相近的成分能够较好的分离。 分流不改变样品浓度，只改变峰的信号强度。 Split ratio (分流比) 10:1即为 11份，1份进柱子，10份流失。 分流进样注意事项 分流进样时为了保证分流比的概念真实有效，样品（溶剂+被分析物）必须与载气充分混合，形成一个均匀的混合物。如果进样量过大，溶剂会膨胀为很大的体积，致使进样口衬管过载。其结果必将导致样品从吹扫出口流出而造成样品损失，同时也会造成载气输入管路的污染。 进样（气化）室温度  考虑样品的稳定性？样品是否能够气化？一般在200~250℃ 考虑样品中各组分的沸点