肿瘤侵袭转移与干预研究.ppt

基本方法： 正常中期染色体制备 基因组DNA分离 DNA标记 杂交和染色 荧光镜检和图象分析 Tissue Microdissectionequipments Tissue MicrodissectionAnalysis of single cell by immunohistochemical stain (p53) V. Sequence analysis to detect mutations IV. Stimulated PCR from single cells III. Microdissection of stained single cells II. p53 Immunohistochemical staining I. Ethanol fixation/paraffin embedding Breast Colon Laser Capture Microdissection (LCM) 应用： 确定肿瘤染色体区DNA扩增与丢失 对肿瘤进行分期与分级 诊断与鉴别诊断 预后与治疗反应 RNA水平(Transcriptomics)研究 差异显示(Differential display PCR, DD-PCR) 原理： 基因差异表达 用oligo-dT引导逆转录，再用随机引物和逆转录（锚定引物）扩增cDNA片段，PAGE胶分离，比较胶上差异条带识别差异表达基因。 操作步骤 样品RNA分离 反转录成cDAN PCR扩增 电泳 结果分析 DD-PCR SSH 抑制削减杂交(SSH) 样品1 样品2 基因芯片 原理与操作步骤 在固相支持物上合成/印迹探针阵列 样品（DNA/mRNA）标记 样品与芯片杂交 激光扫描、计算机分析表达谱 蛋白质组技术（Proteomics)表达蛋白质组学和功能蛋白质组学 蛋白质双向电泳（2-D gel) 图像采集与计算机分析 质谱技术 蛋白质芯片技术 2-D gels Protein arrays Summary: Tumor samples Genomics transcriptomics proteomics Delection Amplification Methylation Mutation (CGH array) Protein profiles (2-D gel Mass spectrometry protein microarray Molecular classification Biomarkers Target therapy Gene profiles (cDNA microarray ,SAGE) Tissue/cells Tissue arrays Cell arrays Nature is beautiful Research is fascinating 主要参考文献 1. 曾益新主编， 肿瘤学， 人民卫生出 版社：1999，第一版 2. 汤钊猷主编，现代肿瘤学，上海医 科大学出版社, 2001，第二版 3. 陈意生等主编, 肿瘤分子细胞生物学,人民军医出版社：2002，第一版 ? 包括PAI-1,2,3 ? PAI-1为糖蛋白，52KD, PAI-2分子量46.6KD, 为u-PA抑制剂 ? 在多数肿瘤中高表达，提示 预后好。 (2) PAI的分类与功能 图5 PAI-1 mRNA在鼻咽癌细胞中的表达 图6 各鼻咽癌细胞RT-PCR结果PAI-1 mRNA与GAPDHmRNA灰度比值 (1) 分类与结构 ? 为Zn?依赖的内肽酶，包括 胶原酶(collagenase) 明胶酶(gelatinase) 基质溶素(tromitysinase) 膜型MMP(MT-MMPs) 2. 基质金属蛋白酶及其抑制剂 ( MMPs/TIMPs) ? 能降解ECM中所有成份。 ? 诱导和促进新生血管形成。 ? 调节瘤细胞的粘附。 免疫组化检测鼻咽癌组织中MMP-2,MMP-9,LMP-1的表达情况 慢性鼻咽炎 鼻咽癌 淋巴结转移癌 MMP-2 MMP-9 （五） 机体免疫与转移 （1） NK细胞 为第一道防线，无需抗原刺激 可杀伤瘤细胞。 实验依据： 1、参与控制转移的免疫细胞 清除NK细胞 ?小鼠 环磷酰胺 移植肿瘤于小鼠 转移早 ?裸小鼠 T细胞缺陷， NK细胞存在 移植肿瘤于小鼠 转移率正常 ?先天无NK Bejge 小鼠转移早 （2）巨噬细胞 其活性与转移抑制能力呈正相关 实验表明： 巨噬细胞抑制剂 促进转移 巨噬细胞激活剂 减少转移 （3）T细胞 Ts细胞 促进肿瘤生长与转移