台盼蓝 细胞计数.docVIP

基本性质 中英文名称：台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝　　 分子式：C34H24N6O14S4Na4 　　分子量: 960.82 　　可溶于水（10mg/ml) 　　是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。 台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。 机理 　　正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。 　　台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。 台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。 步骤 　　步骤：(来自supergama) 　　1、4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。（也可买Gibco的成品）; T$ d \! h% l, E) Z) A- W 　　2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。 　　3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。（终浓度0.04%） 　　4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞和死细胞。 1 e7 e* I* S) ^% X8 U$ K- _ 　　5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。 6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100% 其他 　　保存条件 　　室温保存 　　说明 　　有潜在致癌危险 　　为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。