病理切片技术应用指导培训.pptVIP

透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在10min至1h，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过2h为宜。材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱水彻底，组织则显现透明状态，如组织中有白色云雾状，说明脱水不净，须返工处理，但返工的效果往往不好。使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分，并保持其无水状态。 ㈤ 浸蜡与包埋 包埋用的石蜡，熔点在50～60℃之间，应根据材料本身的硬度、切片的厚薄和当时的气温条件来选用。一般动物材料最常用的石蜡熔点为52～56℃，切片薄的用58～60℃的，切片厚的则用52～54℃的；室温10～19℃时选用52～54℃的石蜡可顺利切片，冬季可用熔点46～48℃的石蜡，夏季可选56～58℃的。 浸蜡温度保持在56～60 ℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。 含有杂质的新蜡或用过的废蜡可清洁后再用，方法是将石蜡放入锅内，加热到开始冒白烟，然后用小火继续加热30min（注意别超过发火点），使其去除水分和挥发性杂质，并在温箱中过滤以去除灰尘等颗粒。 浸（透）蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石蜡熔点3度，使经过透明的组织块依次用石蜡与二甲苯的等量混合液、纯石蜡处理。纯石蜡应处理2～3次，浸（透）蜡的时间依材料性质而定，一般每次需15～30min。浸（透）蜡的关键是控制温度的恒定，切忌忽高忽低，温度过低石蜡凝固无法渗透，温度过高使组织收缩发脆。 包埋是使浸透蜡的组织块包裹在石蜡中。 具体做法：先准备好纸盒或包埋底模，将熔蜡倒入盒内，迅速用预温的镊子夹取组织块平放在纸盒底部，切面朝下，盖好包埋盒，再轻轻提起平放在冷冻台，使其迅速冷却凝固，30min后取出。包埋用蜡的温度应略高于透蜡温度，保证组织块与周围石蜡完全融为一体。石蜡的迅速冷却也很重要，否则包埋块中将会产生结晶。以后切片时引起碎裂。 ㈥ 粗修包埋好的蜡块 组织块两边的蜡应修掉，上下可以保留一点以利于连片，至组织最大面暴露出来，组织面向下放在冷台上或冰盒上面。 ㈦ 切片 切片机是用来作各种组织切片的一种专门设计的精密机械，常用的是旋转式切片机，它的夹物部分是上下移动前后推进的，而夹刀部分则固定不动。主要部件是安装切片刀的刀台、安装包埋块的标本台和控制切片厚度的微动装置。切片时切片刀固定不动，转动转轮，标本台上下运动并按调好的切片厚度向前推进一定的距离，组织块上下运动一次，便在刀片上得到一张合乎厚度要求的切片。 夹物部分 夹刀部分 手轮 控制切片厚度的微动装置 切片的质量与切片刀直接相关。切片前必须磨刀，方法是：将切片刀装上刀柄、刀背夹、滴少许石蜡油在平滑的磨刀石上，将刀贴着磨刀石以背向刀口方向磨，使用完毕后应及时用二甲苯将石蜡油擦净。也可以采用一次性刀片（Leica 819）。 切片方法：将所要切的包埋块固定在标本台上，使包埋块外切面与标本夹截面平行，并让包埋块稍露出一截。将刀台推至外缘后松开刀片夹的螺旋，上好刀片，使切片刀平面与组织切面间呈15°左右的夹角，包埋块上下边与刀口平行。 调节微动装置： 根据要求切片的厚度调节微动装置，调节时应注意指针不可在两个刻度之间，否则容易损伤切片机，将刀台移至近标本台处，让刀口与组织切面稍稍接触。 先粗切至组织面完整暴露，用毛刷把蜡屑刷掉，保持工作台面洁净以防污染。当组织块接近刀面时，速度放缓。同时向组织面吹气，防止静电。 ※注意事项 切片刀要锋利，避开缺口 切片刀放置的角度大小要合适 切片机各部位的零件螺丝要旋紧 用力要均匀 切片中存在的问题及补救方法 ⑴石蜡带弯曲不直 A.石蜡块上下两边不平行 B.石蜡块的上下两边不和刀口平行 C.刀口锋利不一，局部产生差异 D.蜡块的一边较另一边为软，或两边的硬度不一致 E.材料未居蜡块正中央 F.材料大而形不正 补救措施: A．取下台木，将两边修干 B．调节标本台，使两者平行 C．移动刀片，改用新的刀口 D．待蜡块冷却后再切，或重新包埋 E．用刀片切去部分石蜡，使材料居中 F．在大的一边切去少许石蜡 ⑵切片分离、不能连成带状 A．室温过低 B．石蜡过硬 C．材料边缘留蜡太少 D．刀的角度不适合 补救措施： A．在切片机上方开一电灯或提高室温 B．在蜡块面加一层45℃的软蜡或用手指蜡摩擦块面 C．重新包埋 D．矫正刀的角度 ⑶切片卷起呈圆筒状 A．室温过低 B．石蜡过硬 C．刀口太钝 D．刀的倾角太大 补救措施： 提高室温 ;加软蜡 ;用毛笔将蜡片摊开压住，切2—3 片即成带; 减小倾角 ⑷切片粘附于切片刀，皱摺在一起 A．室温过高 B．石蜡过软 C．刀口上留有一层石蜡 D．刀口钝 补救措施： 降低室温; 将蜡块放入冰箱冷冻层10分钟; 切片厚度，改用硬蜡包埋，用二甲苯