蛋白质研究技术应用.pptVIP

第四节 蛋白质的结构分析 一、蛋白质一级结构的测定 二、已知序列肽链的人工合成 三、蛋白质构象的确定 一、 蛋白质一级结构的测定 －Edman降解法（PTH法） 　N末端氨基与苯异硫氰酸酯(PITC)在弱碱性条件下,形成相应 的苯氨基硫甲酰衍生物，后者在硝基甲烷中与酸作用发生环 化，生成相应的苯乙内酰硫脲(PTH)－AA,而从肽链上降解,产 物可用气-液色谱法进行分离鉴定。 弱碱 硝基甲烷 苯氨基硫甲酰衍生物 HPLC 分析氨基酸 二、已知序列肽链的人工合成 合成肽用途：结构分析、抗体制备、活性肽功能、新蛋白研究。 　　 抗体制备：在动物体内，10-15 个残基的小肽能刺激机体产生抗 体。从而对蛋白质进行分离、检测及细胞内定位。 　　 新蛋白研究：分析末端AA,反推核苷酸,合成引物,PCR获得基因或 ORF,BLAST分析,同源性比对;蛋白质特征及功能分析 。 tBOC: 叔丁氧羰基，保护氨基酸 氨基端. CF3COOH: 三氟乙酸，去保护 DCC: 二环己基碳二亚胺，缩合剂 HF:氢氟酸，把肽链从聚苯乙烯小 株上断裂下来 挂接 去保护 缩合 去保护 断裂 肽链人工合成 三、 蛋白质构象的确定 1.X射线结晶（X-Ray Crystallography） 2.冷冻电镜术（Cryoele