酶催化特性与反响动力学.ppt

3.利用作图法测定Km和Vmax值 1 Km 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V Vmax [S] Vmax 双倒数作图法 -1/Km 1/Vmax 斜率=Km/Vmax 简单单底物酶促动力学的扩充 大多数情况下，酶促反应会形成多个中间酶复合物 底物抑制作用，在高浓度底物时，反应速度降低，由于酶分子表面存在两种类型的底物结合位点所致 多活性位点，对于某些寡聚酶存在一个或以上的活性位点。 （三）多底物的酶促反应动力学 双底物双产物的反应按动力学机制可分为两大类 : A+B P+Q 双底物 双产物的反应 序列反应 形成三元复合物 乒乓反应 不形成三元复合物 有序反应 （orderd reactions） 随机反应 （random reactions） 有序反应及动力学方程 E+A+B—ABE—PEQ—E+P+Q A为领先底物 动力学方程 随机反应动力学方程 特点是：底物A和B随机和酶结合，产物P和Q随机和酶脱离 乒乓反应 （双置换反应）动力学方程 双置换反应的特点是：酶同A的反应产物（P）是酶同第二个底物结合之前释放出来，相应的酶转变E。 乒乓反应动力学曲线图 * （如何形成中间产物降低活化能的机制） * * 单位是mol/L。 * 如K+、Na+、Ca2+、Mg2+ 、 Cl-等。 还原型谷胱甘肽等。 类型 V Km 无抑制剂 V Km 竞争性抑制 不变 增加 非竞争性抑制 减小 不变 反竞争性抑制 减小 减小 不同类型抑制作用的常数变化 一、酶反应动力学 ◇ （一）反应速率及其测定 ◇ （二）反应分子数和反应级数 ◇ （三）各级反应的特征 （一）反应速率及其测定 反应速率是以单位时间内反应物或生成物浓度的改变来表示。随着反应的进行，反应物逐渐消耗，分子碰撞的机会也逐渐渐小，因此反应速率也随着减慢（图9-1））因为每一瞬间的反应速率都不相同，所以用瞬时速率表示反应速率。 （二）反应分子数和反应级数 1.反应分子数 2.反应级数 反应分子数是在反应中真正相互作用的分子数目。有一个反应的分子参加的反应为单分子反应。有两个反应的分子参加的反应为双分子反应。3个分子同时反应的几率很小。 总反应速率与浓度的关系能以单分子反应的速率方程式表示，为一级反应。以双分子反应的速率方程式表示，为二级反应。 （三）各级反应的特征 1.一级反应 反应速率与反应物浓度呈正比。 2.二级反应 反应速率与反应物浓度的二次方（两种底物浓度的乘积）成正比。 3.零级反应 反应速率与反应物浓度无关而受其他因素的影响而改变的化学反应。 二、底物浓度对酶反应速率的影响 ◇ （一）中间络合物学说 ◇ （二）酶促反应的动力学方程式 ◇ （三）多底物的酶促反应动力学 E + S ES P + E k1 k2 k3 （一）中间络合物学说 k4 三个假设： （1）E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而 ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即 V＝k3[ES]。 （2）S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]＝[St]。 （3）P→0 忽略 这步反应 （一）中间络合物学说 在酶催化的反应中，第一步是酶与底物形成酶－底物中间络合物。当底物分子在酶作用下发生化学变化后，中间复合物再分解成产物和酶。 E + S ==== E-S ??? P + E ? 许多实验事实证明了E－S络合物的存在。E－S复合物形成的速率与酶和底物的性质有关。 1.ES复合物已被电子显微镜和X射线晶体结构分析直接观察到。 2.许多酶和底物的光谱性在形成ES复合物后发生变化。 3.酶的物理性质，经常在形成ES复合物后发生变化。 4.超离心沉降过程中，可观察到酶和底物的共沉降。 酶催化的中间产物理论 E+S P+ E ES 能量水平 反应过程 ?G ?E1 ?E2 酶（E）与底物（S）结合生成不稳定的中间物（ES），再分解成产物（P）并释放出酶，使反应沿一个低活化能的途径进行，降低反应所需活化能，所以能加快反应速度。 （二）酶促反应的动力学方程式 ◇ 1.米氏方程及推导 ◇ 2.动力学参数的意义 ◇ 3.利用作图法测定Km和Vmax值 1.米氏方程及推导 ◇ 底物浓度对酶促反应速度的影响 ◇ 米氏方程 ◇ 米氏方程的推导 底物浓度对酶促反应速度的影响 在低底物浓度时, 反应速度与底物浓度成正比，表现为一级反应特征。 当底物浓度达到