蛋种鸡接种禽流感疫苗后雏鸡母源抗体水平的检测.docVIP

蛋种鸡接种禽流感疫苗后雏鸡母源抗体水平的检测 沙依兰古丽1 刘宏杰2 薛 英1 雷程红1 田 华2 王 延1 成 进1 1 新疆畜牧科学院兽医研究所/新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生药部,乌鲁木齐 830000 2 新疆康盛家禽育种有限公司,乌鲁木齐 830000 关键词： 禽流感 HI抗体 H5亚型 H9亚型 禽流感不仅可以造成多种家禽的感染和死亡，还可以直接引起人的感染发病，并致人死亡，是重要的人畜共患病，给人民身体健康带来极大隐患。针对禽流感在我国的流行情况，全国一些重点科研单位、大专院校开展了对禽流感的病毒分离鉴定、分子流行病学分析、疫苗研制等领域的研究，取得了良好的进展。研制的疫苗在控制和预防2003年底到2004年初全国发生的禽流感疫情中发挥了重要的作用。但是，在疫苗使用中，也引出了一些问题。基层养殖场应用禽流感疫苗时，免疫程序和方法混乱，一些养鸡场在疫苗接种后常常出现抗体水平不高，或者出现类似于非典型性禽流感的症状，这些问题都对禽流感的诊断及疫病控制带来了很大困难。养殖户为此也常常提出禽流感疫苗接种程序或初次免疫时间等问题。针对这种情况，我们随机选择了新疆某一现代化的专业蛋种鸡场，在种鸡接种禽流感疫苗后，我们对其孵化的蛋雏鸡进行了母源抗体的检测，目的是为制定科学的免疫程序提供可靠依据。现将检测情况报告如下： 1 材料和方法 1.1 96孔微量反应板、微量移液器。 1.2 阿氏液。 1.3 PH7.2、0.01mol/L PBS。 1.4 1%红细胞的制备 采集2~3只健康非免疫公鸡的血液，与等体积的阿氏液混合，用pH7.2、0.01mol/L PBS液洗涤3次，然后用PBS配成1%的红细胞悬液，4℃保存备用。 1.5 禽流感标准抗原 H5亚型和H9亚型的禽流感抗原购自中国哈尔滨兽医研究所。 1.6 禽流感标准抗体 H5亚型和H9亚型的禽流感抗体购自中国哈尔滨兽医研究所。 1.7 试验蛋种鸡 为新疆某一现代化专业蛋种鸡场高兰褐壳蛋种鸡，该群蛋种鸡分别在18周龄（4月龄）时接种了中牧股份生产的H5亚型和H9亚型的双价灭活油乳剂疫苗，于32周龄（7个半月龄）时接种了华南农大生产的H5亚型和H9亚型的双价灭活油乳剂疫苗，接种剂量为0.5ml/羽，对二次接种一个月以后（38周龄）的种蛋进行孵化，对商品代蛋雏鸡进行了母源抗体检测。 1.8 血清样品制备 将孵化出的雏鸡，分别每隔1日随机抽取8~10只鸡，采血，分离血清，以备用来进行母源抗体的检测，并用于分析母源抗体的持续期。 1.9 HI抗体的检测方法 按照GB/T18936—2003颁布的高致病性禽流感诊断技术方法，用96孔微量反应板进行微量血凝抑制试验（HI），试验用抗原稀释倍数为4HAU。以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。并按常规方法设置阴性和阳性对照。 2 结 果 这批雏鸡共计采集血清174份，按照GB/T18936—2003颁布的高致病性禽流感诊断技术及判定标准进行了HI试验，将结果统计后取平均值，结果见下表。 表1 蛋雏鸡的禽流感母源抗体（H5亚型、H9亚型）检测结果 试验雏鸡日龄 检测血清样品数 H5亚型抗体效价平均值（2Lg） H9亚型抗体效价平均值（2Lg） 1 10 7.60 6.70 3 10 6.40 6.90 5 10 6.60 6.60 7 9 6.60 6.70 9 10 4.10 4.10 11 10 6.60 5.00 13 10 4.40 4.00 15 10 4.40 3.90 17 10 4.00 3.00 19 10 5.60 4.40 21 9 5.30 2.80 23 9 4.50 1.90 25 10 4.40 1.60 27 10 5.10 2.10 29 10 3.40 1.40 31 9 3.60 0.50 33 10 3.10 0.50 35 8 2.17 0.83 2.1 将禽流感（H5亚型和H9亚型）HI的母源抗体检测结果绘制成曲线图，可见抗体消长动态。见下图： H5亚型抗体效价平均值（2L H5亚型抗体效价平均值（2Lg） H9亚型抗体效价平均值（2Lg） 试验雏鸡（日龄） 试验雏鸡（日龄） 图1 蛋雏鸡母源抗体消长曲线 3 小结与讨论 3.1 从这批雏鸡的母源抗体的检测结果及消长曲线可以看出，禽流感H5亚型的母源抗体持续期约为20d，禽流感H9亚型的母源抗体持续期约为10d。 3.2 在本次抗体检测中发现，H5亚型的抗体和H9亚型的抗体在最初10d内，抗体水平比较接近，H5亚型的母源抗体在雏鸡10日龄以后开始缓慢下降，而H9亚型的抗体滴度在雏鸡10日龄之后迅速下降，到20d后基本上检测不到H9抗体。说明该种