mrd检测在急性白血病分层治疗中的意义解读.pptxVIP

北 京 大 学 人 民 医 院北京大学血液病研究所微量残留病检测在急性白血病分层治疗中的意义 Minimal Residual Disease (MRD)MRD:The leukemic population undectable by morpglogic methodshas been defined as MRD MRD is a term used when there is evidence( immunophenotypic, molecular, or cytogenetic) that leukemic cells remain in the BM but there are insufficient cells to be detected by routine examination under the microscope.MRD检测的方法MRD监测的临床意义MRD 检测在分层治疗中的意义FCM-MRD检测的结果MRD检测方法PCR: 基因定性、 定量（RQ-PCR）b.多参数FCM：免疫标志发病时寻找免疫标志和基因标志进行检测RQ-PCR检测MRD特点目的基因：融合基因：BCR/ABL,AML1/ETO,PML/RAR? 基因重排： IgH，TCR(10-4-10-5) 基因突变：FLT3-ITD,NPM1(10-5) 基因表达增加：WT1,PRAME((10-3)优点：灵敏度高10-5-10-6/5 copes /10-5 特异性强缺点:1. 融合基因：应用范围有限： ALL:10-30%，AML:30-50% 2. IgH/TCR : 90%, 操作复杂，费时,需要基因测序，特异引 物/探针(每例患者特异） 3.容易污染，出现假阳性。FCM MRD检测的特点优点： 灵敏：ALL-10-4 , AML-10-3-10-4 （获取细胞相关） 定量单位：细胞% 快速：检测当天即可知结果 操作简便 应用范围广：90%缺点： 表型的变化:假阴性 受前体B细胞(Hematogones)的干扰： 形态幼稚，表达CD34,TDT 在小儿、化疗后、SCT后比例增加5% 需要较高的分析水平和技能 应用不够广泛，需要建立标准化操作FCM-MRD：白血病细胞的特异抗原：NG2(7.1)IM/MRD检测的抗原CD34,CD33：正常分化抗原：表达于正常细胞的不同系列、分化阶段（非白血病细胞所特异） 白血病相关的免疫表型(LAIP)（Leukemia Associated ImmunoPhenotype）定义：正常骨髓/PB中不表达或表达比例较低的 免疫表型 LAIP的分类 交叉系列抗原: B、T、髓、NK细胞抗原 非同期抗原共表达: CD15/CD117 CD34/CD64 抗原表达量异常：表达强度过高、过低或不表达 异常的光散射信号：FSC和SSC基础：熟悉正常细胞不同分化阶段抗原出现的顺序 和表达量的规律Cytometry (communications in Clinical cytometry)38:139-152(1999)诱导缓解后MRD水平与累计复发率Coustan-Smith E.BLOOD,2000;96:2691Leukemia(1999)13,558-567Johns HopkinsMost information displays No. of cases(%) A CD19/CD45/CD20/CD10 (N=82)CD45 vs CD10 48(59)FSC vs CD10 13(16)FSC vs CD20 11(13)CD10 vs CD20 4(5) 76(93)B CD19/CD45/CD9/CD34 (N=77) CD45 vs CD34 27(35) FSC vs CD34 17(22)CD34 vs CD9 16(21) 72(94)A+B