分子诊断刘斌.pptxVIP

第1页/共30页 肿瘤的发生根本原因是由于基因的异常改变引起。随着分子生物学的发展，特别是人类基因组计划的顺利实施、人类基因组序列的剖析、相关基因功能的识别，对肿瘤的发生、发展及转归机制有了更深入的了解，使人类除了能更早期发现及诊断肿瘤外，还可预测人群或个体发生肿瘤的风险（肿瘤易感性）、病因检测、肿瘤的恶性特征、对特定治疗手段的反应（疗效预测）、转移复发的可能与早期发现等，进行肿瘤诊断、分类、判断预后及指导治疗。第2页/共30页 如今检测癌患者的基因状态有很多方法： IHC，FISH，CISH，Southern Blot，PCR，Real Time PCR。现如今FISH技术已应用于实体瘤、血液肿瘤、产前产后多个领域。第3页/共30页荧光原位杂交Fluorescence in situ hybridization原理利用DNA碱基对的互补性，将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的目标样本的DNA(玻片上的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况FISH第4页/共30页第5页/共30页FISH检测类型基因过表达的检测基因突变及其检测基因的易位与重排染色体数目的检测端粒酶与肿瘤的关系检测第6页/共30页一.基因过表达检测1.对HER2的检测检测方法检测指标优点缺点IHCHER2蛋白费用低光镜即可观察结果准确性差，判断主观性强，假阳性、阴性率高CISHHER2 DNA光镜即可观察结果对低倍扩增及染色体非整倍扩增检测灵敏度下降FISHHER2 DNA对于低倍、高倍及染色体非整倍性扩增检测准确性高，灵敏度特异性好，结果判断比较客观，是HER2基因检测的“金指标”相对费用较高其中FISH是FDA批准的方法，被誉为“金标准”。第7页/共30页ICH赫赛汀第8页/共30页 FISH技术对HER2基因的检测HER-2基因为致癌基因，位于17q11.2-q12可编码跨膜蛋白，基因有扩增的乳腺癌对三苯氧胺不敏感。HER-2基因扩增是决定Herceptin是否有效的关键性指标。第9页/共30页阻断异常信号转导增强抗体依赖性细胞毒作用赫赛汀(Herceptin)抗肿瘤机制第10页/共30页乳腺癌和胃癌中HER2基因的扩增比率标本HER2总数阳性例数乳腺癌2617胃癌145总计40例 所做乳腺癌中HER2基因检出阳性率为65%；胃癌中HER2基因检出阳性率为35.7%。第11页/共30页2.非小型细胞肺癌中EGFR基因扩增的检测 EGFR扩增EGFR无扩增第12页/共30页NSCLC中EGFR基因扩增 鳞癌扩增为80%左右，腺癌与大细胞癌为60%左右基因扩增能引起EGFR酪氨酸激酶活化，激发其下游一系列信 号传导途径，促进肿瘤发生发展，基因扩增与酪氨酸激酶抑制 剂的敏感性相关基因扩增病人用药有效率达38.9%，无扩增的病人用药有效率在9.8%第13页/共30页 EGFR功能 EGFR在多种上皮性肿瘤高表达, 其过表达与肿瘤细胞的增殖、活动性、粘连性、侵袭性、凋亡抑制和血管生成相关, 最终导致细胞的转化、增殖, 抵抗细胞凋亡、促进细胞生存, 与肿瘤的发生、发展、临床分期、生存期、预后和对治疗反应相关。第14页/共30页CancerEGFR变异Gene transcriptionCell Cycle ProgressionTKATP抗凋亡第15页/共30页目前应用于NSCLC的靶向治疗药物吉非替尼(gefitinib, ZD-1839,商品名Iressa 2003 FDA approved)厄洛替尼 (erlotinib,OSI-774,商品名Tarceva 2004 FDA approved)西妥昔单抗: (cetuximab FDA 2004 approved) 第16页/共30页二.基因突变及其检测Real-time检测基因突变原理TaqMan 探针的机理:DNA聚合酶在延伸阶段把探针切碎，产荧光基团和荧光淬灭基团分开，于是荧光得以检测。第17页/共30页EGFR基因突变突变率在33%左右，其中腺癌高达48%（董强刚等 2006）东方亚裔明显高于高加索人种、女性高于男性、非吸烟高于吸烟EGFR19、21外显子的突变占95%左右EGFR 变异使EGFR 酪氨酸激酶ATP结合位点的某些关键基团发生重构, 使得小分子酪氨酸激酶抑制剂更易与之结合，增强了与ATP竞争性抑制剂的相互作用 全球突变型NSCLC用Iressa/Tarceva有效率约80%； 无突变NSCLC用ressa/Tarceva有效率约10%。 第18页/共30页Real-time检测 EGFR 19、21突变第19页/共30页K-RAS基因突变的检测KRAS基因属于RAS家族的一员，包括K-RAS,N-RAS,H-RAS具有GTP酶活性，活化状态