T-SPOT实验操作流程-2017.docxVIP

PAGE 8 T-SPOT.TB实验操作流程 样本要求： 肝素抗凝采血管采集全血样本（无需空腹） 血量要求： 一般患者5-8ml 免疫力低下患者8-10ml 2岁以下儿童2-3ml 室温（18-25℃）保存与运输，不得冷冻与冷藏 近期有输血或做过PET-CT的患者，建议两周后再送检 运输过程中防止颠簸，避免样本溶血，溶血样本不能进行检测 送检时间： 无延长试剂（T-Cell Xtend）：4小时内送检，8小时内完成细胞分离 有延长试剂（T-Cell Xtend）：4小时内送检，32小时内完成细胞分离 准备工作 1、配套试剂无菌确认： RPMI-1640培养基 AIM-V培养基 淋巴细胞分离液 正常为清澈、透明、无漏液（出现浑浊，有异物，漏液情况的，应停止使用） 2、设备准备： 使用消毒液擦拭生物安全柜并紫外灭菌30min以上 确认培养箱运行在37℃、5％CO?浓度条件，并确保水盘中有足够的水，防止培养过程中干板 使用消毒液擦拭所需移液器，确保移液器表面及腔体无菌 3、耗材准备： 无菌15ml锥底离心管（3-4支/人份） 无菌吸管（2-3支/人份） 无菌加样枪头（10μl、100μl、1ml若干） 无菌1.5ml离心管（1-2支/人份） 无菌50ml离心管（1-2支）（用于实验中分装1640培养基，降低污染风险） 实验中会用到的其他耗材及工具等 4、加延长试剂（T-