第二章-2 DNA的复制.pptVIP

DNA聚合酶α 是DNA复制的主要酶，由4个亚基组成，分子量分别是160~185kd、70kd、60kd和50kd，除具有5’ → 3’的聚合酶活性外，还有引物酶活性，是一个双功能酶（引发、延伸），但无3’ → 5’ 外切活性。 功能 前导链的起始（具有DNA复制的起始 能力，与引物酶结合，启动引物合成） 后随链的复制（经常引发RNA合成，聚合活性小，只能合成短片段） DNA聚合酶δ 由2个亚基组成，125kd和25kd，既具有3’ →5’外切酶活性，又有5’→3’的聚合酶活性，是前导链合成的主要酶类。 δ酶需要一个37kd的辅助蛋白促进δ酶与模板/引物相互作用——PCNA（增殖细胞核抗原），它是控制细胞分裂的“细胞周期调控蛋白”的一种，研究发现，PCNA表达水平高，DNA聚合酶活性高，细胞分裂、复制旺盛。 DNA聚合酶ε 具有象δ一样的3’ → 5’ 外切酶活性，但不依赖于PCNA，在许多细胞中均分离得到，与后随链合成有关，是一种修复酶，参与DNA的修复合成。辅因子：① PCNA ②复制因子C （RF-C）有ATP活性，是δ 酶的辅助因子，夹子装置器 ③复制因子A （RP-A）——单链结合蛋白 ④DNA解旋酶，拓扑异构酶 组成 细菌 真核生物 复制酶 DNA-pol Ⅲ全酶 pol-δ/pol-ε 进行性因子 β夹子 PCNA 定位因子 γ复合物 RF-C 引物合成酶 Dna G pol-α（引物合成酶） 去除引物 RNase H和DNA-pol Ⅰ RNase H1和MF-1 滞后链修复 DNA-pol Ⅰ和Lingase pol-ε和Lingase Ⅰ 解螺旋酶 Dna B T抗原 消除拓扑张力 旋转酶 拓扑异构酶Ⅱ 单链结合 SSB RP-A 真核生物DNA复制过程 复制叉上存在DNA聚合酶α和两个DNA聚合酶复合体（δε），前者负责引物合成，引发复制起始；后者分别负责先导链与后随连冈崎片段的合成。 RNA 酶H1发挥核酸内切酶活性，在靠近RNA与DNA的连接处切开引物，由具备5’-3’核酸外切酶活性的FEN1蛋白降解RNA片段，再由DNA连接酶Ⅰ将相邻的冈崎片段连接起来。 真核生物DNA复制5’端的问题 通过形成端粒结构和具有反转录酶活性的端粒酶来防止DNA复制时后随链缩短而产生的染色体部分缺失。 端粒酶能利用自身携带的RNA链作为模板，以dNTP为原料，以反转录的方式催化合成模板后随链5’端DNA片段或外加重复单位（如人染色体端粒为TTAGGG），以维持端粒一定的长度，从而防止染色体的短缺损伤。 端粒酶(Telomerase)　 一种含有RNA的蛋白（RNP），由RNA和蛋白质两种成分组成，能以其所含的RNA为模板合成DNA端粒结构。 端粒酶中的RNA长约150bp，如四膜虫的是159bp，其中含有“CAACCCCAA”序列，能附着于DNA末端并与末端互补配对，起到模板的作用，蛋白质起到反转录酶的作用，合成末端。 端粒酶一旦出问题，往往会导致疾病的发生： 端粒及端粒酶与衰老有关　　越来越多的证据表明端粒长度控制着衰老进程，端粒缩短是触发衰老的分子钟。 端粒酶活化与肿瘤　　在正常的人体细胞中，端粒程序性地缩短限制了转化细胞的生长能力，这很可能是肿瘤形成的一个抑制机制 。 DNA复制的调控 一、原核生物的调控机制 细胞内复制叉的多少决定了复制起始频率的高低，直接调控因子是蛋白质和RNA。 大肠杆菌染色体DNA的复制调控 起始频率：Dna A蛋白的浓度 DNA复制的调节主要发生在起始阶段，复制的启动与DNA甲基化以及与细菌质膜的相互作用有关。 oriC Dam甲基化酶 GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC GATC CH3 半甲基化的起点不能发动复制起始，直到Dam甲基化酶使起点全甲基化。然而起点处的GATC位点在复制后约13min才再甲基化，而基因组其他部位的GATC通常在复制后1.5min内就能全部甲基化。 与ori C靠近的dna A基因启动子的甲基化同样要延迟，因此dna A基因的转录也被阻遏，降低了Dna A蛋白水平，从而使DNA复制起始频率降低。 什么原因造成ori C和dna A位点再甲基化延迟？ 半甲基化的oriC DNA可与细胞膜结合，但全甲基化的不能结合 这种结合使得正在复制中的DNA可随着细胞膜生长而被移向细胞的两半部分，只在此过程完成后，DNA的起点才从膜上脱落下来，并被甲基化，开始新一轮的复制。 Col E1 的复制调控