核酸分子杂交 (1).ppt

Content of Table 一、核酸分子杂交技术的原理 二、核酸探针的制备 三、核酸探针的标记 四、核酸分子杂交技术 五、DNA芯片技术 一、核酸分子杂交技术的原理 有互补特定核苷酸序列的单链DNA或RNA混在一起时，其相应同源区段将会退火形成双链结构。 如把一段已知基因（DNA或RNA）的核酸序列用合适的标记物（如放射性同位素、生物素等）予以标记，当作探针（probe), 与变性后的单链基因组DNA或RNA等进行杂交。 用合适方法（如放射自显影或免疫组织化学等技术）把标记物检测出来，就可确定靶核苷酸序列的拷贝数及表达丰度等。 应 用： 1）检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系； 2）用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、拷贝数及表达丰度。 影响杂交的因素 核酸分子的浓度和长度 温度 离子强度 杂交液中的甲酰胺 核酸分子的复杂性 非特异性杂交反应 常用于预杂交的封闭物 变性的非特异性DNA：常用鲑鱼精子DNA或小牛胸腺DNA。当与滤膜一起孵育后，除滤膜上已吸附样品DNA的区域外，它们可被吸附到所有其它区域，使整个背景覆盖一层。由于它们与探针无同源性，在交杂反应中可大大减少探针的非特异性结合，使背影清晰。 高分子化合物：某些高分子化合物具有封闭膜上非特异位点的能力。一般常用小牛血清白蛋白。 二、核酸