《SCT 3023-2004 无公害食品 麻痹性贝类毒素的测定 生物法》.pdf

SC/T 3023-2004 无公害食品 麻痹性贝类毒素的测定 生物法 发布时间：2004 年 1 月 7 日 实施时间：2004 年 3 月 1 日 发布单位：中华人民共和国农业部 1、范围 本标准规定了麻痹性贝类毒素(PSP)的测定方法——生物法。 本标准适用于软体动物贝类可食部分中麻痹性贝类毒素(PSP) 的测定，其他贝类食品中 PSP 的测定可参照执行 2、原理 根据小鼠注射贝类抽取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，校正鼠单位，计 算确定每 100g 贝肉内的PSP 的含量。所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的麻痹性 贝类毒素的总量。 3 、定义 下列定义适用于本标准。 鼠单位 mouse unit ，MU 对体重为 20g 的小鼠腹腔注射 1mL 麻痹性贝类毒素后，小鼠在 15min 时死亡所需的最 低毒素量。 4、试剂 4.1 盐酸溶液：0.1mol/L 。 4.2 盐酸溶液：5 mol/L 。 4.3 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L 。 4.4 麻痹性贝类毒素(Saxitoxin)标准溶液：100 μg/mL，经酸化，含有20 ％的乙醇作为保护 剂，冷藏保存，无限期稳定。 5、仪器和设备 5.1 均质器。 5.2 天平(感量 0.1g) 。 5.3 离心机。 5.4 pH 计。 5.5 秒表。 5.6 玻璃皿：烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等。 5.7 注射器：1mL。 5.8 注射器针头：8 ＃。 5.9 小鼠：体重为 19g～21g 的健康 ICR 系雄性小鼠，若体重19g 或21g ，查表 C.1 的校 正系数便可得到实际的死亡时间，体重23g 或已用过的小鼠则不能使用。 6、ICR系小鼠毒性单位的确定 6.1 PSP 工作标准溶液 用移液管取 100 μg/mL Saxitoxin 标准液 1mL．于 100mL 容量瓶中，加入用盐酸酸化至 pH 为 3 的蒸馏水并定容。该液为l μg/mL Saxitoxin 标准液，pH 在 2.0～4.0 之间。在 3℃～ 4 ℃条件下能稳定数周。 6.2 测定用标准溶液 分别用 10mL 、15mL、20mL 、25mL 和 30mL 水稀释 10mL 浓度为 1 μg/mL 的 Saxitoxin 标准液，稀释液的 pH 应为 2～4 。 6.3 中值死亡时间的标准液选择 6.3.1 将按 6.2 配制的各浓度的标准稀释液各 1mL 腹腔注射小鼠数只，选择中值死亡时间 为 5min～7min 的浓度。如某浓度稀释液已达到要求，还需以 1mL 水的增减量进行补充稀释 试验。 例如：用 25mL 水稀释的 10mL 标准液在 5min～7min 杀死小鼠，还需进行 24mL ＋10mL 和 26mL ＋10mL 的稀释度的试验。 6.3.2 先将小鼠称重(精确到 0.5g)，以 10 个小鼠为一组。用中值死亡时间在 5min～7min 内 的各种浓度的标准稀释液两份(最好是三份)注射小鼠，测定并记录每只小鼠腹腔注射完毕至 停止呼吸的所需死亡时间。 6.3.3 记录注射完毕至死亡时间的最短间隔为 5s，即 7s 记为 5s，8s 记为 10s(见附录 B) 。 6.4 毒素转换系数(CF)的计算 6.4.1 小鼠中值死亡时间的选择 若注射某浓度标准稀释液的 10 只小鼠中值死亡时间5min 或7min 则弃去该组结果； 若注射另一浓度标准稀释液的 10 只小鼠中值死亡时间在 5min～7min，即使个别小鼠死亡时 间5min 或7min ，也应使用该组的数据。但是若注射某浓度标准稀释液后，10 只小鼠中有 3 只以上存活，则要另取 10 只小鼠进行重复试验。 6.4.2 校正鼠单位(A) 根据注射毒素后中值死亡时间为 5min～7min 的 10 只小鼠的个别死亡时间，由附录 B 分别查出鼠单位(M)，再由附录 C 查出小鼠的重量校正因子(是) ，每毫升标准稀释液的校正 鼠单位(A)按公式(1)计算。 A = k×M ……………………………………… (1) 式中： A — 校正鼠单位(MU) ； M — 鼠单位(MU) ； K — 小鼠的重量校正因子。 6.4.3 毒素转换系数(F) 毒素转换系数(F