植物离体快速繁殖和脱病毒技术应用.pptVIP

以马铃薯茎尖脱毒培养为例 图1-1 脱（无）毒试管苗生产程序 茎尖繁殖试管苗切断到试管薯繁殖过程 图4-2 不同浓度IAA与GA（A）、GA+BAP（B）互作对试管苗生长及试管薯形成的影响Fig. 4-2 Details of the interaction of various IAA concentrations with GA3 （A） and GA3 + BAP （B） on the growth and microtuberization of potato explants. 试管薯和微型薯比较(Atlantic 和Favorita） 思考题 归纳植物离体快速繁殖技术的主要步骤。 采取哪些措施可防止或减轻外植体褐变及试管苗玻璃化？ 植物脱病毒方法有哪些，概述各种脱毒方法的原理。 概述影响茎尖培养脱病毒效果的因素及脱病毒植株的鉴定方法。 第5章 植物离体快速繁殖和 脱病毒技术 5.1 植物快速繁殖技术 5.2 无病毒植物的培养 概念：所谓快速繁殖，就是将外植体在人工培养基和合适的条件下进行培养，以在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法。 特点：繁殖速度快；使用材料少，生产效率高，省时省工；可大量繁殖脱毒苗；利于种质资源的保存和交换等；节约空间，不受季节限制，有利于植物的工厂化生产；在无菌条件下进行，不受病虫害侵害。 5.1 植物快速繁殖技术 快速繁殖过程一般包括四个阶段，即无菌培养物的建立、芽的增殖、诱导生根和试管苗的驯化和移载。 5.1.1 无菌培养物的建立 初代培养：进行离体繁殖时首先必须建立的无菌培养物。需注意以下几点： （1）保证无菌：外植体、培养基、培养室无菌状态。 （2）条件合适：合适的外植体；合适的培养基；适宜的培养条件。 （3）技术过关：要熟练掌握无菌操作技术。 （4）防止褐变：外植体褐变是指在接种后，其表面开始褐变，有时甚至会使整个培养基褐变的现象。它的出现是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，将酚类化合物氧化成醌类物质，它们多呈棕褐色，会抑制其它酶的活性，从而影响所接种外植体的培养。 褐变的主要原因 ①植物种类和基因型 由于多酚氧化酶活性上的差异，不同品种间的褐变现象是不同的。 ②取材部位和生理状态 处于幼龄期的植物材料褐变程度较浅，而从已经成年的植株采收的外植体，由于含醌类物质较多，因此褐变较为严重。 ③培养基成分 无机盐浓度过高、细胞分裂素的水平过高等都会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而使褐变现象加深。 ④培养条件不当 如果光照过强、温度过高、培养时间过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速褐变程度。 减轻褐变现象发生的方法 ①选择合适的外植体 一般来说，最好选择生长处于旺盛的外植体，这样可以使褐变现象明显减轻。 ②合适的培养条件 无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度等均可以减轻材料的褐变现象。 ③使用抗氧化剂 在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血酸、PVP等抗氧化剂能够减轻很多外植体的褐变现象。另外，使用0.1%-0.5%的活性炭对防止褐变也有较为明显的效果。 ④连续转接 对容易褐变的材料可间隔12~24h的培养后，再转移到新的培养基上，这样经过连续处理7-l0d后，褐变现象便会得到控制或大为减轻。 5.1.2 培养物的增殖 （1）促进腋生分枝 促进腋芽的形成和生长：使用外源的细胞分裂素可以打破顶端优势，促进腋芽生长，形成芽丛，经反复切割和继代培养，可短期获得大量芽。有些植物即使在含有细胞分裂素的培养基中其项端优势也不易被打破，接种的茎尖只能长成不分枝的一根枝条，此时可以用切段法（每个切段带有一个腋芽）加以繁殖。 这种繁殖方式不经过发生愈伤组织而再生，所以是最能使无性系后代保持原品种遗传特性的一种繁殖方式。 （2）诱导不定芽形成 不定芽：从任何除现有芽之外的器官和组织上通过器官发生重新形成的芽叫不定芽。 通常采用从器官中直接产生不定芽：A 有些植物具有从各个器官上长出不定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。B 在离体培养条件下，培养基中提供连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能力被大大地激发起来。C 在许多常规方法中不能产生不定芽的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽，如柏科，松科，银杏等一些植物。 (3)诱导胚状体形成 是由植物器官、组织和细胞培养直接发生类胚结构，最后以肧状体成苗的方式。在组织培养条件下胚状体的发育过程类似于合子胚的发育：细胞经脱分化后，发生持续细胞分裂增殖，并依次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期，进而成为成熟的胚状体。 肧状体途径优点是增值率高，同时具胚根和胚芽，免去生根一步；可用于制作人工种子，便于运输和保存。缺点是肧状体成苗率低，遗传性状不稳定。 5.1.3 诱导生根