基因项目工程专题培训.pptVIP

高中生物 选修3现代生物科技专题;专题1 基因工程;基础理论和技术的发展催生了基因工程 ;;（1）原核生物的基因结构;;;;;真核细胞的 基因结构;原核细胞与真核细胞的基因结构比较;※2基因表达的调控;;;基因工程产品;;;资料;; ;基因工程的别名;;基因工程培育抗虫棉的简要过程：;;基因工程培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？;;一、“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）;※限制酶在原核生物中的作用 ;一、“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）;(1)限制酶识别序列的特点;(2)切点：;●实质：;;;3.作用结果：切割DNA分子产生两种类型的末端：黏性末端和平末端;(1)黏性末端;;　　DNA被限制酶切断后有两个反向互补的“黏性末端”。被同一种限制切断的几个DNA具有相同的黏性末端，能够通过互补进行配对。;(2)平末端 在识别顺序的对称轴上，对双链DNA同时切割。;4.举例：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开;要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？;※限制酶的命名●第一个字母（大写、斜体） 该酶的微生物属名●第二、三个字母（小写、斜体） 代表微生物种名●第四个字母（斜体） 代表寄主菌的株或型●用罗马数码I、II、III等区分同一株具  有不同特异性的酶;例 流感嗜血杆菌中三个酶的命名：Haemophilus influenzae d 属名 种名 株系 H in d I II III Hind I Hind II Hind III ;※限制酶的分类 根据限制酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰酶活性可分为： I型 II型 III型;1.I型限制酶属于复合功能酶，兼有修饰和切割DNA两种特性。;2.III型酶与I型酶特性类似，也有甲基化功能，但无ATP酶和DNA解旋酶活力。在DNA链上有特异位点切割，其切割位点在识别位点以外。;3. II型酶（1）II型酶的识别 识别序列一般为4-6个碱基对，通常是反转重复顺序，具有180o的旋转对称性。（2）II型酶的切割功能;★5’端黏性末端（cohesive end) 在识别顺序的双侧末端切割DNA双链，于对称轴的5’末端切割。;;★ 3’端黏性末端 在识别顺序的双侧末端切割DNA双链，于对称轴的3’末端切割。;※少数有特殊性质的酶1异源同工酶（isoschizomer） 定义： 来源不同但能识别和切割同一位点的酶。;2同尾酶（isocaudarner)  为识别与切割顺序相互有关的酶。 有些限制酶的识别序列包含在另一些限制酶的识别顺序之中 酶来源不同，但它们作用后能产生相同的粘性末端。;DNA连接酶;二、“分子缝合针”——DNA连接酶;1.作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个重组的DNA分子;DNA连接酶与DNA聚合酶一样吗？为什么？ ;2.作用结果：在切口处催化形成磷酸二酯键 。 ;（1）从大肠杆菌中分离得到：E.coliDNA连接酶，只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接。 （2）从T4噬菌体中分离到： T4DNA连接酶，既可以“缝合”双链DNA片段互补的粘性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。;※T4噬菌体DNA连接酶连接带粘性末端DNA分子的效率远高于连接平末端的DNA分子 ※连接反应需要ATP提供能量。;外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？;作为运载体必须具备哪些条件？;三、基因的载体——“分子运输车”;4.质粒——基因工程最常用的运载体;能复制并带着插入的目的基因一起复制;（4）有一个至多个限制酶切割位点， 供外源DNA（目的基因）插入;　　;动动手: