222动物细胞融合与单克隆抗体的制备.pptxVIP

？？？？植物细胞杂交技术利用什么原理？用什么方法可以诱导植物细胞融合？植物细胞杂交技术有什么用途？？一、原理：细胞膜具有流动性细胞的全能性二、诱导方法：离心 振动 电激 、聚乙二醇脱分化三、用途：获得杂种植株再分化一、动物细胞融合 两个细胞正在融合 受精作用有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。一、动物细胞融合(一)概念 动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多 个动物细胞结合形成一个细胞的过程。杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。（二）动物细胞融合的过程与植物原生质体融合原理相同，方法类似。⑴.原理：1、动物细胞融合的基本原理是什么？ 与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性。2、动物细胞融合的诱导方式是什么？与植物细胞融合的诱导方式有什么不同？⑵.诱导方式：物理法：电激、振动、离心化学法：聚乙二醇（PEG）生物法：灭活的病毒例如：仙台病毒紫外线（不感染细胞）丧失感染性仙台病毒（诱导细胞融合）保留融合活性细胞A细胞B物理法化学法灭活的病毒杂交细胞细胞膜连接细胞融合，形成杂交细胞（细胞膜具有一定的流动性）细胞膜被病毒颗粒穿通灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面(三)动物细胞融合的应用1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡 、人—胡萝卜等2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。3、重要用途：制备单克隆抗体。二、单克隆抗体（一）、什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞抗原浆细胞（效应B细胞）增殖分化成浆细胞一种三、单克隆抗体1、抗体是由何种细胞产生的？2、抗体是如何产生的？3、一种B淋巴细胞能产生几种抗体？（二）获得抗体的传统方法1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。2、缺点： 产量低，纯度低，特异性差。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。 1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念用单个B淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆，得到的基因型相同的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。1、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖？不可能2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？癌细胞3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？细胞融合创始人：米尔斯坦（三）、实验原理：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖柯勒单克隆抗体动物细胞培养技术动物细胞融合杂种细胞既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体，如何大量生产单克隆抗体？利用B淋巴细胞产生抗体的功能。利用肿瘤细胞无限增殖的特性。利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。动物细胞融合单克隆抗体的制备应用：设计方案：　一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体　小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖杂种细胞单克隆抗体的特点：化学性质单一、特异性强（四）、单克隆抗体的制备过程具有筛选作用的培养基（选择培养基）获得能产生相应抗体的B淋巴细胞（浆细胞）3.过程：诱导细胞融合常用方法是什么？如何获得大量的单克隆抗体？注射抗原的目的是什么？如何进行筛选？①免疫动物②免疫B细胞和骨髓瘤细胞的制备③细胞融合④杂交瘤细胞的选择培养灭活的仙台病毒⑤杂交瘤细胞的筛选杂交细胞？种BB 、B瘤 、瘤瘤 、⑥分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立⑦单克隆抗体的大量制备（AA型、BB型）AB型杂交瘤细胞能产生所需抗体的细胞 抗原 ？ ？ 效应B细胞筛选筛选抗原骨髓瘤细胞小鼠效应B细胞过程：细胞融合、筛选杂交瘤细胞多孔培养板单个　细胞培养，筛选能产生特定抗体的细胞群体外培养 体内培养提取出单克隆抗体考考你！1.在制备单克隆抗体的过程中，选用哪两种细胞进行融合？为什么选择这两种细胞？浆细胞和骨髓瘤细胞浆细胞能产生单一抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不能产生单一抗体。考考你！2、在这过程中进行了几次筛选？分别在哪个步骤进行筛选？两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞；第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。五、单克隆抗体的应用 请同学们根据自己所收集的资料，谈谈单克隆抗体的应用。１、可用于作为诊断试剂：有准确，高效，简易、快速的优点２、可用于疾病治疗３、可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的 “生物导弹“。）　“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物小结 细胞