抗原抗体反应和免疫化学.pptVIP

（2）沉淀反应： 对流免疫电泳 - + 对流免疫电泳：即将抗原和抗体在琼脂凝胶孔中电泳，带负电荷的抗原向正极运动，带正电荷的抗体向负极运动，二者在琼脂凝胶中相互作用而形成沉淀线。 （3）补体结合反应： 补体结合反应 一、体外免疫学检测 免疫标记技术： ——免疫荧光技术 免疫荧光直接法 免疫荧光间接法 免疫标记技术：——免疫酶技术 1、包被抗体 洗 2、加抗原 洗 3、加酶标抗体 洗 4、加底物显色 1、包被抗原 洗 2、加抗体 洗 3、加酶标抗 球蛋白 洗 4、加底物显色 ELISA双抗体夹心法 ELISA间接法 免疫标记技术：——放射免疫测定法（RIA） 将放射性检测高灵敏度与抗原-抗体反应高特异性相结合、对抗原(激素、药物等)进行测定的技术。即利用标记物与非标记物对抗体的竞争结合作用，通过比较未标记的未知量抗原及已知量标准抗原，分别对放射性标记抗原与特定抗体结合的抑制效应，可得出未知抗原的量。 胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。 免疫标记技术：——胶体金免疫技术 二、体内免疫学检测 （一）体液免疫检测 1、I型超敏反应皮肤试验 用常见变应原作皮内注射或划痕后，在20分钟内引起红斑及丘疹。如超过1cm或无红肿但注射处有痒感，或全身有不适反应者均为阳性，反之为阴性。 2、中和反应皮肤试验 将微量外毒素注射于受试者前臂屈侧皮内，24-48小时局部出现皮肤红肿者为阳性反应，表示无免疫力。阴性反应为有免疫力。 锡克实验检测对白喉易感性：注射一定量的白喉毒素于受试者前臂屈侧皮内。受试者如无免疫力，24～48小时，局部皮肤出现红肿，直径在1～2厘米者为阳性反应。相反，受试者如有免疫力，其血清中含有足量的抗毒素抗体，能中和注入的毒素，局部不出现红肿，为阴性反应。此试验除用来测定机体对白喉的易感性以外，还可检测白喉预防接种后是否产生免疫力。 二、体内免疫学检测 （二）细胞免疫检测 以特异性抗原或有丝分裂原注入皮内，剌激体内致敏T细胞分化增殖，释放淋巴因子，引起局部皮肤的IV型超敏反应。 1、特异性抗原皮肤试验：在受试者前臂内侧皮内注入少量可溶性抗原，24-48小时后，观察局部皮肤红肿硬结的大小。大于1cm即为阳性，表示有细胞免疫力。 2、植物血凝素（PHA）皮试：将PHA注射于受试者前臂屈侧皮内，6-12小时后局部出现红斑硬结，24-48小时达高峰，即为阳性反应，常用于检测细胞免疫水平。 抗原抗体反应与免疫化学 多塞(1916～) 法国免疫学家、医学家1965年发现人类的白细胞表面抗原(HLA) 系统，此发现在 输血和组织器官移植中有重要意义，于1980年获诺贝尔奖。 利根川进(1939～) 日本分子生物学家1976年发现了抗体多样性的遗传现象，80年代初揭示了 抗体合成的基本原理，为了解机体如何制造出抵抗多种疾病 所需的不同抗体作出了重要贡献。于1987年获诺贝尔奖。 杰尼(1911～1994)丹麦免疫学家 50至70年代相继提出了 抗体形成的“天然”选择学说、抗体多样性发生学说和免疫系 统 的网络学说，由此建立了细胞免疫学理论。于1984年获诺 贝尔奖。他被称为是“现代免疫学之父”。 2.1抗原的免疫原性与分子基础 2.1.1抗原及其免疫原性基础 抗原概念：指能刺激机体免疫诱导免疫应答，并能与应答产生的抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。 免疫性能：完全抗原和半抗原 免疫原性和免疫反应性 抗原产生作用的因素：免疫原性是抗原最重要的性 质，免疫原性取决于三个因素：抗原性质、宿主的反 应性和免疫方式。 宿主的反应性 免疫方式 抗原性质？ 抗原性质： 异物性：分子量大小：化学结构： 抗原特异性基础 半抗原及其应用（药物残留检测） 半抗原-载体效应：载体不仅赋予半抗原以免疫原性，还与半抗原免疫应答的记忆性密切相关。