《微生物实验室的培养》.pptVIP

1.无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 无菌操作是培养微生物成功的关键！ （1）消毒定义： 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义： 是指杀灭病原微生物的方法。 是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子）的方法 a.灼烧灭菌 3.常用灭菌的方法 b.干热灭菌： 160-170℃ 下加热1-2h。 c.高压蒸气灭菌： 100kPa、121℃ 下维持15-30min. 取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。 LB液体培养基——细菌的扩大培养 LB固体培养基——细菌的划线分离 灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37℃摇床培养12小时。 注意事项: 1.火焰旁从斜面上用接种环取菌； 2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌，冷却后方能取菌； 3.取菌后封口膜和棉塞复原。 1.平板划线法： 1）灼烧接种环； 2）接种环冷却后，蘸取带菌培养物； 3）在近火焰处，让带菌接种环在固体培养基上划线。 注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。 2.划线首尾不能相接。 3.划线后，培养皿倒置培养12~24h。 1 1.线条不重叠 2 2-3.从上次的末端开始，交叉2~3条线 3 4 4.最后的划线不能与第一区相连。 分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。 2.稀释涂布平板法 稀释操作 注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处. 1.临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2.长期保存：甘油冷冻管藏法 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 实验操作成果评价 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。 1．关微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ） A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 D 解析：A、B选项的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源；有的碳源可同时是氮源；有的碳源同时是能源；有的碳源同时是氮源，也是能源。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。 退出 解析：发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），A正确；B错误，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C正确，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。 学习目标 新课导入 微生物 1 培养基 2 无菌技术 3 基础知识 微生物 1 培养基 2 无菌技术 3 制备牛肉膏蛋白胨培养基 1 倒平板操作 2 大肠杆菌的扩大培养 3 微生物的接种技术 4 大肠杆菌分离后保存 5 实验操作 制备牛肉膏蛋白胨培养基 1 倒平板操作 2 大肠杆菌的扩大培养 3 微生物的接种技术 4 大肠杆菌分离后保存 5 自我检测 课题1：微生物的实验室培养 1.了解有关培养基的基础知识； 2.掌握无菌操作技术； 3.了解纯化大肠杆菌的基础知识。