《第三章非细胞微生物的形态与结构》-公开课件.ppt

2、二十面体对称(icosahedral symmetry)壳体： 构成对称结构壳体的第二种方式是蛋白质亚基围绕具立方对称的正多面体的角或边排列，进而形成一个封闭的蛋白质的鞘。 3、复合对称( complex symmetry) 大肠杆菌的T4噬菌体是由椭圆形的二十面体头部和螺旋对称的尾部组合而成，是病毒中复合对称的代表。 有尾噬菌体（tailed phage），其壳体由头部和尾部组成。包装有病毒核酸的头部通常呈二十面体对称，尾部呈螺旋对称。 第三节 病毒的复制 病毒的特点： 严格细胞内寄生物，只能在活细胞内繁殖。 病毒的复制： 病毒感染敏感宿主细胞后，病毒核酸进入细胞，通过其复制与表达产生子代病毒基因组和新的蛋白质，然后由这些新合成的 病毒组分装配（assembly）成子代毒粒，并以一定方式释放到 细胞外。病毒的这种特殊繁殖方式称做复制（replication）。 一、病毒的复制周期 复制周期（replicative circle）或称复制循环： 自病毒吸附于细胞开始，到子代病毒从感染细胞释放到细胞外的病毒复制过程。 ①吸附(absorption) ②侵入(penetration) ③复制(replication) ④装配(assembly) ⑤释放(release) 烈性噬菌体的繁殖过程 烈性噬菌体的繁殖过程 ①吸附：噬菌体和宿主细胞上的特异 性吸附部位进行特异性结合，噬菌体以尾丝牢固吸附在受体上后，靠刺突 “钉”在细胞表面上。 ②侵入：核酸注入细胞的过程。噬菌体尾部所含酶类物质可使细胞壁产生一些小孔，然后尾鞘收缩，尾髓刺入细胞壁，并将核酸注入细胞内，蛋白质外留在细胞外。 ③复制：包括核酸的复制和蛋白质合成。噬菌体核酸进入宿主细胞后，会控制宿主细胞的合成系统，然后以噬菌体核酸中的指令合成噬菌体所需的核酸和蛋白质。 烈性噬菌体的繁殖过程 ④装配：主要步骤有：DNA分子的缩合——通过衣壳包裹DNA而形成头部——尾丝及尾部的其它部件独立装配完成——头部与尾部相结合——最后装上尾丝，至此，一个个成熟的形状、大小相同的噬菌体装配完成。 烈性噬菌体的繁殖过程 ⑤释放： 方式： 裂解：多以裂解细胞的方式释放。分泌：噬菌体穿出细胞，细胞并不裂解。通常情况下，一个噬菌体通过上述五个过程能合成 100-300个噬菌体。烈性噬菌体的这种生长繁殖方式也称为一步生长， 二、烈性噬菌体与一步生长曲线 烈性噬菌体(virulent phage):能在宿主细胞内增殖，产生大量子噬菌体并引起细菌裂解的噬菌体 烈性噬菌体的 这种生 长方式 称一步 生长。 一步生长曲线（one step growth curve） 概念：经过一步生长实验后,得到以培养时间为横坐标,以噬菌斑数为纵坐标绘制成的有潜伏期、裂解期和稳定期的特征性曲线。 1939年，Max Delbruck Emory Ellis： E. coli / bacteriopage 1、用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞； 2、数分钟后，加入抗噬菌体的抗血清； 3、将上述混合物大量稀释，防止抗血清的作用和防止新释放的噬菌体感 染其它细胞； 4、保温培养并定期检测培养物中的噬菌体效价； 5、以感染时间为横坐标，病毒的感染效价为纵坐标，绘制出 病毒特征性 的繁殖曲线； 实验过程: 敏感菌10ml + Phage 1ml 混匀，5min,使之吸附 离心或用抗phage血清处理, 去除过量phage 高倍稀释,吸附phage的菌悬液 (避免多次吸附) 37℃培养,定时取样 人为裂解处理（每5min） 样品中加入氯仿裂解细胞 裂解液加入敏感菌液中 适当稀释混合液 涂布于琼脂培养基上 24-48h 计数噬菌斑 一步生长曲线（one step growth curve） 噬菌体复制（繁殖）的三个阶段： 1、吸附期(adsorption period)； 游离的噬菌体吸附到宿主细胞 2、潜伏期(latent period)；从噬菌体吸附到细胞到释放出新噬菌体的最短时期 3、裂解期(lysis period)； 随着菌体不断破裂，新噬菌体数目增加，直到最高值平稳期（plateau phase） 一步生长曲线的特征性数据: 潜伏期和裂解量。 潜伏期（latent period）：毒粒吸附于细胞到受染细胞释放出子代毒粒所需要的最短时间。噬菌体几分钟，动物病毒与植物病 毒以小时或天计算。 裂解量（burst size)：每个受染细胞所产生的子代病毒颗粒的平均数目。等于潜