中药药理实验方法学上课讲义.pptVIP

药理学实验基础知识; 实验动物分类： 按种系分三种情况 A、按遗传学控制方法分为4类：近交系动物、突交系动物、F1杂种动物、封闭群动物。 B、未经遗传学控制的杂种动物。 C、按微生物学控制方法分5类：无菌动物、悉生动物、无特殊病原体动物、清洁动物、普通动物。 ; 我国将实验动物分为四级： 一级动物：普通动物（CV）---普通自然环境中饲养繁殖的健康带菌动物。（教学和一般实验用） 二级动物：清洁动物（CL）---用于一般动物实验，除一级标准外，还需要不带有动物传染病病原体。 ; 三级动物：无特殊病原体动物（SPF），在CL基础上还需不带有干扰实验的微生物。 按纯系动物的要求进行繁殖，在隔离器内或层流室内饲养，只有一些不致病的细菌丛，没有致病的病原体。 ;实验动物的选择： a.选对与人的机能、代谢、结构、疾病特点和机能反应相近似的实验动物。药物的反应与人的反应相似的动物。 b.选用遗传背景明确，模型指标显著且稳定，解剖、生理特点符合实验目的的实验动物。 ;;NIH小鼠 ;C57BL/6J小鼠：近交系小鼠，乳腺肿瘤发生率低，但对致癌因子敏感。肺癌发病率雌性26％，雄性29％。对放射性照射极为敏感。用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学和单克隆抗体等研究。 ;SD大鼠;ＳＤ大鼠：远交系大鼠， 对呼吸道疾病抵抗力强，对性激素刺激性高，多用于生理、营养、安全性试验。 ; 豚 鼠; 新西兰兔;;;; 果 蝇; 猴; 小鼠：常用于药物筛选、急性毒性实验。价格便宜，繁殖周期短，易得。（18~22g） 大白鼠：常用于抗关节炎实验、利胆实验、子宫实验、长期毒性实验（150~200g） ; 豚鼠：研究平喘药和抗组胺药常用，对组胺特别敏感。毒理学中过敏实验（300~500g） 家兔：常用于观察药物对呼吸、心脏、血管、肠肌运动的影响，热源检查、解热实验；雌兔用于避孕药研究和子宫实验。（1.5~2.5Kg） ; 犬：常用于慢性实验如高血压、胃瘘、肠瘘、冠脉流量，还有长期毒性实验。 其他动物：鸽子、蛙类、果蝇、蚕、猴、猫、鸭等。 ; 分组方法： 分层分组法---按性别、体重、测定指标（如基础体温、痛阈）先分层，再分组； 随机数字表法：按随机数字表来分组。 编号：标记常用苦味酸（3%~5%）、中性品红（0。5%）、硝酸银（2%）；方法见书，较大的动物如犬、猫等，可用号码牌挂在动物颈部或将特制的铝牌固定在耳壳上。 ; 取血方法： 小鼠、大鼠---①断尾、②眼底（内眦球后静脉丛，小鼠可取0.2~0.3cc,大鼠可取0.5~1cc)、③断头、颈动脉取血。 兔--①耳缘静脉，②心脏，③股动脉 犬--①后肢外侧小隐静脉，②前肢背侧皮下头静脉，③耳缘静脉 豚鼠--①耳缘切割，②心脏穿刺。 ; 常用抗凝剂 ①草酸钾 饱和液2滴于试管中，80度以下烘箱烘干，可抗凝3~5ml血液。若测定钾、钙含量的不用。 ②肝素 1%肝素0.1ml于试管中，80~100度烤干，可抗凝5~10ml血液 ③枸橼酸钠 3.8%枸橼酸钠1份，可抗凝9份血液。 血压实验用5~7%的枸橼酸钠抗凝。 ;实验报告或论文的书写;常用动物的捉拿和给药方法;给药： 途径--口服或灌胃、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、静脉注射。 静脉注射：家兔（耳缘静脉）、狗（后肢小隐静脉）、豚鼠（后脚掌外侧的静脉或颈外静脉） ; 给药剂量： 根据单位体重给药。 ;处死和处理方法;影响中药药理作用的因素;为减少差异，应注意：;药效学研究注意事项;注意点： ①主要指标确定，按新药指南要求或咨询药审中心确定。 如抗癌中药研究 ②模型的选择：有文献依据、符合中医临床“证”的模型，方法要注意体内、体外相结合。;体外：重复性好，用药量少，节省动物。但干扰因素多。 体内：结果接近临床，必须做。 原则---体内、体外实验相结合。 ③ 药品： 品种鉴定（赤芍）、稳定工艺，现在要求用中试产品。量的问题。 ;④ 剂量：一般设三个剂量 低剂量--临床等效量 中剂量--临床等效量的2倍 高剂量--临床等效量的4倍 ;剂量换算;临床常用剂量折算法;;; ⑤ 组的设置 一般设6个组：空白组、模型组、模型+小剂量组、模型+中剂量组、模型+大剂量组、