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ABO 血型鉴定标准操作程序文件 1、【实验原理】 根据红细胞上有或无A 抗原或（和）B 抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定A B O 血型。所谓正定型，是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B红细胞来测定血清中有无相应的抗A或（和）抗B。 2、【使用的标本种类和收集方法】 2.1、受检者5％红细胞悬液 红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。 2.2、受检者血清 采取受检着静脉血2-3ml，置水浴箱中至完全凝固，3000转/分钟离心5分钟，分离上层血清备用。 2.3、标本接收 2.3.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。 2.3.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。 2.4、标本容器要求：洁净一次性塑料试管 2．5、 5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液制备方法 2.5.1、制备方法 分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3 次，经盐水洗涤3次 ，取压积红细胞1滴加入生理盐水16滴（0.8ml）配成5％的红细胞悬液。 2.5.2、保存条件：配制好的5％的红细胞悬液在试管上注明红细胞血型及配制时间，2-8℃避光保存，有效期3天。3、【使用的试剂】 3.1、抗A 、抗B定型试剂（单克隆抗体） 3.1.1、批准文号： 3.1.2、生产厂家： 3.1.3、保存条件：2-8℃避光保存，有效期内使用。 4、【仪器】 4.1、仪器型号： 4.2、仪器厂家： 4.3、许可证号： 4.4、仪器使用具体要求见离心机使用维护程序。 5、【操作步骤、报告结果】 5.1、 正定型：取清洁试管2支作好标记，分别加入抗A（蓝色）和抗B（黄色）标准血清各2滴。每管加入被检者5％红细胞悬液各2滴，混匀，1000转/分钟离心一分钟或在室温放置1小时，轻轻摇匀，涂至载玻片上，用显微镜观察是否凝集。 5.2、反定型：取清洁试管2支作好标记。用滴管分别加入被检者血清各2滴，A和B型5％标准红细胞悬液各2滴。混合。立即以1000转/分钟离心1分钟，轻轻摇匀，涂至载玻片上，用显微镜观察是否凝集。 5.3、结果见下表： 注：（＋） 凝集（－） 不凝集 抗A 抗A 抗B 血型 A细胞 B细胞 + - A - + - + B + - - - O + + + + AB - - 6、【注意事项】 6.1、标准血清质量应符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。如出现混浊或变色则不能使用。 6.2、试剂红细胞以3 个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤3 次，以除去存在于血清中的抗体及可溶性抗原。 6.3、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。 6.4、操作方法应按规定，一般应先加血清， 然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。 6.5、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。 6.6、观察时应注意区别真假凝集。 6.7、判断结果后应仔细核对，记录，避免笔误。 7、【临床意义】 输血已成为临床上必不可少的治疗手段，输血必须输入A B O 同型血，如输入异型血，输入的红细胞可能迅速破坏，导致严重的溶血反应， 常常威胁生命甚至造成死亡。 8、方法的局限性：本方法不能检测出亚型。