糖类药物知识.ppt

;糖类药物 的分类;;多糖在细胞内的存在方式;多糖类药物的药理活性;国内已经上市的部分多糖药物;粘多糖的特点;粘多糖的连接方式;甲壳素;四级结构 ;多糖的结构;多糖的构效关系; 第一节 糖类药物制备的一般方法 一、 游离单糖及小分子寡糖 易溶于冷水及温乙醇。 用水或在中性条件下以50％乙醇，也可以用82％乙醇，在70～78℃下回流提取。溶剂用量一般为材料的20倍，需多次提取。 植物材料磨碎经乙醚或石油醚脱脂，拌加碳酸钙，以50％乙醇温浸，浸液合并，于40～45℃减压浓缩至适当体积，用中性醋酸铅去杂蛋白及其他杂质，铅离子可通H2S除去，再浓缩至粘稠状。 以甲醇或乙醇温浸，去不溶物如无机盐或残留蛋白质等。 ; 醇液经活性炭脱色、浓缩、冷却、滴加乙醚，或置于硫酸干燥器中旋转，析出结晶。单糖或小分子寡糖也可以在提取后，用吸附层析法或离子交换法进行纯化。 二、多糖的分离与纯化 多糖可来自动物、植物和微生物 ，植物体内含有水解多糖衍生物的酶，必须抑制或破坏酶的作用后，才能制取天然存在形式的多糖。 使多糖免受到内原酶的作用。 速冻冷藏是保存提取多糖材料的有效方法。 ; 昆布多糖、果聚糖、糖原易溶于水；壳多糖与纤维素溶于浓酸；直链淀粉易溶于稀碱；酸性粘多糖常与蛋白质结合在一起，提取分离时，通常先用蛋白酶或浓碱、浓中性盐解离蛋白质与糖的结合键后，用水提取，以乙醇或十六烷基三甲基溴化铵（）沉淀酸性多糖，最后用离子交换色谱法进一步纯化。 （－）多糖的提取 第一步脱脂，以便多糖释放。方法是将材料粉碎，用甲醇或1∶1乙醇乙醚混合液，加热搅拌1～3小时，也可用石油醚脱脂。动物材料可用丙酮脱脂、脱水处理。;第二步 多糖的提取方法主要有以下几种： 1、难溶于冷水、热水，可溶于稀碱液者 这一类多糖主要是不溶性胶类，如木聚精、半乳聚糖等。用冷水浸润材料后用0.5／L 提取，提取液用盐酸中和、浓缩后，加乙醇沉淀得多糖。 如在稀碱中仍不易溶出者，可加入硼砂，对甘露聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸络合物的多糖，此法可得相当纯的物质。 2、易溶于温水、难溶于冷水和乙醇者 材料用冷水浸过，用热水提取，必要时可加热至80～90℃搅拌提取。 ; 提取液用正丁醇与氯仿混合液除去杂蛋白（或用三氯乙酸除杂蛋白），离心除去杂蛋白后的清液，透析后用乙醇沉淀得多糖。 3、粘多糖 有些粘多糖可用水或盐溶液直接提取，但因大部粘多糖与蛋白质结合于细胞中，因此需用酶解法或碱解法使糖-蛋白质间的结合键断裂，促使多糖释放。 一般组织中存在多种粘多糖。需要对粘多糖进行分离纯化 。 ;（1）碱解法 多糖与蛋白质结合的糖肽键对碱不稳定，故可用碱解法使糖与蛋白质分开。 但若硫酸基与邻羟基处于反式结构或硫酸基在3或6，此时易发生脱硫作用。这类多糖不宜用碱解法提取。 （2）酶解法 理想的工具酶是专一性低的、具有广泛水解作用的蛋白酶。鉴于蛋白酶不能断裂糖肽键及其附近的肽键，为除去长肽段，常可与碱解法合用。 常用的酶制剂有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和链霉菌蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶。;（二）多糖的纯化 （1）乙醇沉淀法 乙醇沉淀法是制备粘多糖的最常用手段。乙醇的加人，改变了溶液的极性，导致糖溶解度下降。 向溶液中加入一定浓度的盐，如醋酸钠，醋酸钾、醋酸铵或氯化钠有助于使粘多糖从溶液中析出，盐的最终浓度5％即足够。使用醋酸盐的优点是在乙醇中其溶解度更大，即使在乙醇过量时，也不会发生这类盐的共沉淀。 可以使用多次乙醇沉淀法脱盐，也可以用超滤法或分子筛法（10或15）进行多糖脱盐。; 沉淀物可用无水乙醇、丙酮、乙醚脱水，真空干燥即可得疏松粉末状产品。 （2）分级沉淀法 不同多糖在不同浓度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不同，因此可用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分子大小不同的粘多糖。 在2+、2+等二价金属离子的存在下，采用乙醇分级分离粘多糖可以获得最佳效果。 （3）季胺盐络合法 粘多糖与一些阳离子表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵（）和十六烷基氯化砒啶（）等能形成季胺盐络合物。 这些络合物在，在离子强度大时，这种络合物可以解离，溶解，释放。 ; 使其溶解度发生明显改变时的无机盐浓度（临界盐浓度）这主要取决于聚阴离子的电荷密度。粘多糖的硫酸化程度影响其电荷密度，根据其临界盐浓度的差异可以将粘多糖分离。 降低可抑制羧基的电离，有利于增强硫酸粘多糖的选择性沉淀。季胺盐的沉淀能力受其烷基链中的基数的影响，还可以用不同种季胺盐的