实验8 植物组织总DNA的提取.pptVIP

实验十一 植物组织总的提取 ;二、实验原理 ; 再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(、)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入异丙醇或乙醇使沉淀，沉淀溶于双蒸水或溶液中，即得植物总溶液。之后可加入酶降解其中的，再用氯仿除去酶，得到较纯的制剂。; 的吸收光谱峰在260 处，据计算，测定此波长下溶液的值，当260=1时，双链含量约为50 μ，据此可用紫外分光光度计测定溶液中含量。 由于蛋白质的吸收峰在280 处，在测定含量时，还常计算260280之值，如该值为1.8-2.0时，认为已达到较高的纯度，如低于此值，表明其内含杂质较多，可能影响酶切反应。;水稻品种的幼苗叶片;四、实验器具、药品试剂; 法流程图;五、实验方法;（6）冷却2 后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 ，使两者混合均匀； （7）放入离心机中10 000 离心10 ，与此同时，将600 μl的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中； （8） 用移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30 ，使异丙醇与水层充分混合至能见到絮状物；;（9）10000 离心1 后，立即倒掉液体，注意勿将白色沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上； （10）60 后，直立离心管，加入720 μl的75%乙醇及80 μl 5 M的醋酸钠，轻轻转动，用手指弹管尖，使沉淀与管底的块状物浮游于液体中； （11）放置30 ，使块状物的不纯物溶解； （12） 10000 离心1 后，倒掉液体，再加入800 μl 75%的乙醇，将再洗 30 ；;（13）10000 离心30 后，立即倒掉液体，将离心管倒立于铺开的纸巾上；数分钟后，直立离心管，干燥（自然风干或用风筒吹干）； （14）加入50 μl 0.5 × (含)缓冲液，使溶解，置于37℃恒温箱约15 h，使消解； （15）置于-20℃保存、备用。;称取样品，液氮研磨，加入预热的(65℃ ) 及β-巯基乙醇 ;（1）叶片磨得越细越好。 （2）移液器的使用。 （3）由于植物细胞中含有大量的酶，因此，除在抽提液中加入抑制酶的活性外，第一步的操作应迅速，以免组织解冻，导致细胞裂解，释放出酶，使降解。;七、作业