卫生化学——紫外可见分光光法.pptxVIP

紫外-可见分光光度法（ultraviolet-visible spectrophotometry,UV-Vis）是光谱分析法中一种重要的、广泛应用的分析方法。光谱分析法（spectroscopic analysis）：是指利用物质与辐射能作用时所吸收或发射辐射的特征和强度而建立起来的定性、定量及结构分析方法。如原子吸收分光光度法如原子发射光谱法如紫外-可见、红外如分子荧光分析法紫外－可见分光光度法是根据物质分子对紫外或可见光区电磁辐射的吸收特征和吸收程度建立起来的分析方法．　紫外区波长　200～400nm　 可见区波长　400～760nm特点灵敏度、准确度高、操作简便快速、应用广泛待测物质第一节　概述一、电磁辐射和电磁波谱 光属于file:///C:\Program%20Files\Tencent\QQ\Users\814634982\FileRecv\电磁辐射.ppt电磁辐射，基本单位是光子，光子具有波粒二象性：波动性光的传播速度：c－真空中光速2108 m/sn－折射率，真空中为1λ－波长，单位：m,cm,mm,μm,nm,?（1?=10-10 m）γ－频率，单位：赫兹(周)Hz 次/秒微粒性光量子，具有能量：h－普朗克(Planck)常数6.626×10-34 J·sγ－频率E－光量子具有的能量 单位：J(焦耳)，eV(电子伏特) 1 eV= 1.602×10-19 J波粒二象性结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越长(频率越低)，光量子的能量越低。单色光：具有相同能量(相同波长)的光。混合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在一起. 例如白光。 高能辐射区γ射线 能量最高，来源于核能级跃迁 χ射线 来自内层电子能级的跃迁 光学光谱区 紫外光 来自原子和分子外层电子能级的跃迁 可见光 红外光 来自分子振动和转动能级的跃迁 波谱区 微波 来自分子转动能级及电子自旋能级跃迁 无线电波 来自原子核自旋能级的跃迁波长长电磁辐射按波长顺序排列称为电磁波谱。γ射线→ X 射线→紫外光→可见光→红外光→微波→无线电波第二节 基本原理1.紫外-可见吸收光谱的形成 当光通过气态、液态或固态的物质时，物质分子选择性吸收辐射，产生紫外-可见吸收光谱，又称为分子吸收光谱。 物质分子内部三种运动状态对应三种能级：电子绕核运动（电子跃迁）→电子能级△E电原子在平衡位置上振动→振动能级△E振　分子绕轴转动（分子转动）→转动能级△E转　J3J2J1电子激发态J3J2J1J3J2J1J3J2J1电子基态J3J2J1J3J2J1物质对不同波长的光线具有不同的吸收能力，物质也只能选择性地吸收那些能量相当于该分子振动能变化△Ev、转动能变化△Er以及电子运动能量变化△Ee的总和△E的辐射。由于各种物质分子内部结构的不同，分子的各种能级之间的间隔也互不相同，这样就决定了物质对不同波长光线的选择性吸收。有色物质的不同颜色是由于吸收了不同波长的光（互补光）所致。2.分子吸收光谱及其特征将不同波长的单色光依次通过一定的溶液，分别测出对各种波长的光的吸收程度（用A表示）。以波长为横坐标，吸光程度为纵坐标作图，所得的曲线称为吸收曲线（absorption curve）或吸收光谱(absorption spectrum)。吸收光谱特征：定性依据 吸收峰→λmax 吸收谷→λmin 肩峰→λsh 末端吸收→饱和σ-σ跃迁产生Aσ*π*nPx Py PzPx Py Pzπσ二、紫外－可见吸收光谱与分子结构的关系（一）有机化合物的电子跃迁类型按能量大小：σ→ σ* n → σ* π→ π* n→ π*1. σ→σ* 跃迁．饱和烃类（单键， 且都是σ键）吸收光能后多发生此类跃迁，此跃迁所需能量大，（大约350k j /molσ键）一般吸收＜150 nm 的光，属于远紫外区 （真空紫外区） ２．n→σ* 跃迁 含有杂原子（O、N、S、X）的饱和烃衍生物，这些杂原子上的 n 电子向着σ* 跃迁。吸收波长在200 nm左右． ３．π→π* 此跃迁所需能量小（约200kj/mol键）．吸收波长为200nm 左右．具有碳—碳双键（三键）的化合物会发生此类跃迁．孤立的π→π* 跃迁． 吸收波长在160～190nm左右. 如 CH2 = CH2 　λmax=165nm ε=104共轭双键的π→π* 跃迁． 由于π 与π 键之间相互作用形成离域键，使π→π* 跃迁所需能量减小，而且共轭键越长所需能量越小． 如丁二烯CH2=CH-CH =CH2 λmax=217nm,ε= 21000４．n→π* 易发生在含有杂原子的不饱和基团中，如 C=O 、C=S 、—N=N—等化合物。这些杂