试验1蛋白质的变性凝固及沉淀反应性质.pptVIP

实验一 蛋白质的变性、凝固 及沉淀反应 　一 蛋白质的加热变性凝固 能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性(denaturation)。 　　　　　　 蛋白质的变性和凝固 非极性键/疏水键(hydrophobic interaction) 疏水基 基团无极性，疏水性质 甘氨酸(glycine)、丙氨酸(alanine)、缬氨酸(valine)、亮氨酸(1eucine)、异亮氨酸(isoleucine)、脯氨酸(proline)等。 蛋白质大分子中带有这些疏水氨基酸的部分在水中往往折叠到大分子的内部而远离水相 变性和复性 蛋白质失去亲水性质溶解度变低,蛋白质变性 变性蛋白质在合适的条件下是可以复性的,成为溶解状态 结絮蛋白是一种变性状态 凝固蛋白是不可复性的,彻底失去了恢复空间结构的可能性 结絮和凝固是变性深刻化的体现。 变性一定是生物性质的改变 生物活性丧失或者降低 物理性质改变 化学性质改变 生物化学性质改变 变性的可逆性 可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构可以恢复原状。 不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构不能恢复原状。 一般轻度变性是可逆的，过度变性就是不可逆的。 二　蛋白质的沉淀 破坏了水化层 在高浓度的中性盐溶液中，由于盐离子亲水性比蛋白质强，与蛋白质胶粒争夺与水结合，破坏了蛋白质的水化层。 破坏了电荷 由于盐是强电解质，解离作用强，盐的解离可抑制蛋白质弱电解质的解离，使蛋白质带电荷减少。 可逆沉淀 在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。 在沉淀过程中，Pr的结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。 常用的中性盐硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等，其中以硫酸铵最为常用。 　 不可逆沉淀 在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀和生物碱沉淀等都属于不可逆沉淀 生物碱:含氮碱性化合物 注意事项 逐滴加入，仔细观察 酒精灯使用前注意酒精量的多少，加热时试管口不可对人，不用时熄灭 酒精灯加热时，要进行晃动,避免局部高温,引起试管炸裂 用过的枪头、滤纸放于污物缸 苦味酸属危险试剂 用过的试管仔细清洗 * * 定义：指疏水基团在水溶液中常避开 水而聚集在一起的那种力量 　 或：指非极性基团受到水分子的排斥相互聚集在一起的作用力 生物碱试剂 凡能与生物碱作用生成沉淀，或产生颜色的试剂，统称为生物碱试剂 例如：饱和苦味酸,碘化汞钾，鞣酸等等