动物细胞工程公开课.pptxVIP

细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法,通过 水平或 水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。细胞细胞器动物细胞工程1、动物细胞培养2、动物细胞核移植3、动物细胞融合4、单克隆抗体传代培养（10代--50代）1、动物细胞培养的过程胚胎或幼龄动物器官组织取出组织剪碎胰蛋白酶处理单个细胞细胞悬液原代培养转入培养瓶内培养 （ 贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。接触抑制贴壁生长2、动物细胞培养的条件1）、无菌、无毒的环境（除了灭菌外，还要在培养液中添加一定量 ，定期更换 。2）、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子、 等。）3）、温度和PH： 度 ；PH为 。4）、气体环境： 和 （95%空气和5% CO2 ）抗生素培养液动物血清或血浆36.57.2 -7.4O2CO2二、动物体细胞核移植技术将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物胚胎细胞核移植核移植体细胞核移植（难度高）Ａ母绵羊分娩早期胚胎培养妊娠Ｂ母绵羊胚胎移植多莉羊早期胚胎C母绵羊子宫MⅡ中期卵母细胞乳腺细胞融合后的卵细胞2NCCN体细胞核移植技术过程 核移植细胞核细胞质2N+C问题1、该过程用到了哪些生物技术？2、该过程体现了什么原理？能成功的原因是？3、克隆羊多莉性状像谁？完全像吗？性别是什么？核移植 早期胚胎培养 胚胎移植细胞核的全能性， 卵母细胞的细胞质可以促进细胞全能性的表达B羊 不完全 母羊三、动物细胞融合1、原理： 细胞膜的流动性2、融合方法： 物理 （离心、振动、电刺激） 化学 （聚乙二醇） 生物 （灭活病毒）3、应用：单克隆抗体制备经单一抗原免疫的小鼠用特定的选择性培养基第二次筛选第一次筛选注射到小鼠腹腔体外培养提取能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞杂交瘤细胞B淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞提取单克隆抗体灭活的病毒等手段杂交 细胞问题1、杂交瘤细胞的特点？2、传统抗体的特点？ 单克隆抗体的特点？3、可否用已免疫的B淋巴细胞培养，获得单克隆抗体？既能无限增殖，又能产生抗体 纯度低，特异性不强，灵敏度低特异强，灵敏度高不能，高度分化细胞，不能增殖【即时巩固1】科学家对鼠杂交瘤抗体进行改造，生产出效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。下图表示形成鼠—人嵌合抗体的过程，请据图回答：(1)生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是_______________。(2)将________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细胞，其中至少1个淋巴细胞能产生该抗原的抗体。浆细胞不能无限增殖 抗原(3)在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有______________、_______________的特性。(4)]动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有________。(5)在动物细胞融合过程中，可用________处理离体组织细胞使之分散，其独特的诱导融合方法是使用________ (6)鼠源杂交瘤抗体与普通血清抗体相比较，具有____________的特点。(7)单克隆抗体制备过程中需经过 次筛选，最初筛选的目的是 。产生特异性抗体在体外大量繁殖 动物血清 胰蛋白酶 灭活的病毒特异强、灵敏度高2挑选杂交瘤细胞【即时巩固2】　(宁夏理综)回答下列有关动物细胞培养的问题：(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________。此时，瓶壁上形成的细胞层数是_______________。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是________。(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现__________的现象；但极少数细胞可以相互接触接触抑制单层(或一层)胰蛋白酶衰老甚至死亡连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成________细胞，该种细胞的黏着性________，细胞膜表面蛋白质(糖蛋白)的量_____。(3)现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是___________________________________________________________________。(4)检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到________期的细胞用显微镜进行观察。不死性降低减少由于活细胞的膜具有选择透过性，大分