诱导性多能干细胞的研究进展及其在再生医学上的应用.doc

. Word 文档 文献综述 诱导性多能干细胞的研究进展及其在再生医学上的应用 摘要：通过特定转录因子的过表达使体细胞重编程为诱导性多能干细胞 （induced pluripotent stem cells， iPS 细胞）， 这一成果引起了整个生命科学领域的广泛关注. 由于 iPS 细胞不仅具有与人类胚胎干细胞（embryonic stem cell， ES 细胞） 相似的基本特征， 而且与 ES 细胞相比， 不存在免疫排斥和伦理道德问题， 因此， 具有重要的临床应用潜能. 目前， iPS 细胞主要用于细胞分化和移植， 并可提供体外的疾病模型， 以便于研究疾病形成的机制、 筛选新药以及开发新的治疗方法. 从 iPS 细胞的产生、 诱导方法、 生物学特征和在再生医学中的应用作以研究！ 关键词： 诱导性多能干细胞； 胚胎干细胞； 重编程； 再生医学 正文 1 iPS 细胞的产生 主要经历了 3 个大的阶段. 1981 年，小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES 细胞）建系干细胞是近 30 年来生物学发展最快的领域 （Evans 和 Kaufman），这些具有全能性的细胞在体外可以诱导分化为不同类型的细胞，为组织修复开辟了新途径. 尽管这些细胞来源于囊胚内细胞团，基本不存在去分化和重编程的问题，但自诞生之日起，就一直深受伦理道德和异体排斥等问题的困扰. 随着克隆羊“多利”的诞生，开创了体细胞在卵母细胞中去分化和重编程的先河. 2000 年，Munsie等从小鼠体细胞核移植囊胚中分离得到了小鼠 ES 细胞，从而拉开了治疗性克隆研究的序幕，使利用病人的健康体细胞对自身的病变组织进行修复成为了可能，尽管这一技术可以避免异体移植所造成的排斥反应，但仍然深陷伦理道德争论的漩涡之中. 2006 年，Yamanaka 等将 4 个转录因子导入已分化的小鼠皮肤成纤维细胞，进而获得了类似于 ES 细胞的多能性干细胞，即“诱导性多能干细胞”（induced pluripotent stem cells，iPS 细胞）. 2007 年，Yu 等和 Takahashi 等又分别采用相同的基因改造的方法将人的体细胞逆转为类 ES 细胞，这些划时代的成果不仅解决了利用干细胞进行组织修复所面临的免疫排斥和伦理学问题，在利用病人正常细胞进行组织自我修复方面具有巨大的应用前景，而且是用来研究细胞去分化和基因组重编程的重要途径（不需要胚胎或卵母细胞）. 这个具有里程碑意义的发现揭开了再生医学领域的新篇章. 2 iPS 细胞的诱导方法 迄今为止，短短几年的时间内 iPS 细胞的研究取得了突飞猛进的发展，仅诱导方式而言，从病毒方法如逆转录病毒、慢病毒和腺病毒，到非病毒的转座子载体和蛋白质均能介导外源转录因子诱导产生 iPS 细胞. 利用逆转录病毒和慢病毒载体诱导生成 iPS 细胞时，可能会引起外源基因整合到体细胞基因组，引起插入突变，如果将这些 iPS 细胞应用于临床治疗，会存在安全隐患. 因此，Aoi 等利用不与宿主细胞整合的腺病毒、质粒为表达载体瞬时转染靶细胞可以获得 iPS 细胞，这对再生医学领域的发展是一个重大进步，但是该方法极低的诱导效率限制了其在实际研究中的应用. 随后，部分研究小组尝试利用 Cre/LoxP 系统、oriP/EBNA1 载体及 piggyBac 转座系统等，将外源基因整合到受体细胞中诱导 iPS 细胞，然后再将外源基因从 iPS 细胞的基因组中切除，从而得到不含外源基因整合的 iPS 细胞，该系统诱导产生 iPS 细胞的效率明显高于腺病毒和质粒载体系统，达到 0.1%～1%. 但是，验证基因组不存在外源插入基因的过程十分繁琐，且在基因剔除后，转座酶识别位点有基因重排现象的发生. 最近，Zhou 等利用融合了 4 种转录因子（Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc）的蛋白质直接诱导受体细胞为 iPS 细胞. 蛋白直接诱导 iPS 细胞在重编程过程中不会涉及任何的遗传修饰，且蛋白容易失活. 从 iPS 细胞临床应用的安全角度来看，它是目前最安全的方法，但是需要进一步提高其诱导效率才有可能被广泛应用. 3 iPS 细胞的生物学特征 ES 细胞是全能干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，在体外可以无限增殖. iPS 细胞类似于 ES 细胞，也具有多向分化潜能和发育的全能性，可长期增殖培养并保持高度未分化状态. 在正常培养体系中具有稳定的二倍体核型，Yu 等研究人和鼠 iPS 细胞核型时发现，只在极少数的细胞中出现畸形核，而大多数 iPS 细胞核型正常. 但 Aasen 等发现连续传代培养人 iPS 细胞至第 13 代时畸形核出现的几率显著增加，这与 ES 细胞的生长特性相似. 通