克隆试剂配制及克隆步骤.docVIP

克隆试剂配制 LB液体培养基：取细菌培养用胰蛋白胨10g，细菌培养用酵母提取物5g，NaCl 10g溶于950mL双蒸水中，摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2mL)调节PH值至7.0，加水定容至1000mL，121℃，高压灭菌15min，（必要时根据需要进行分装，然后再高压） LB 固体培养基：按上述方法配制液体培养基，每 100ml 加入 1.5g 琼脂粉， 121℃，高压灭菌15min。从高压锅中取出培养基（注意：不要旋动，否则会发生暴沸），当培养基降温至50-60℃时，方可加入不耐热的抗生素（如氨苄青霉素）。旋动混匀（注意：要避免产生气泡），然后倒至平板。90mm 0.1mol/L CaCl2 溶液：取 1.12g 无水 CaCl2 溶于 90mL 双蒸水中，加入双蒸水定容至100mL，高压灭菌，4℃ 含15%甘油的0.1mol/L CaCl2：称取0.56g CaCl2(无水,分析纯) ，溶于50ml重蒸水中，加入15ml甘油，定容至100m，高压灭菌。（也可再分装感受态细胞时再配制） 氨苄青霉素：贮存液100mg/ml（水），过滤除菌，避光保存-20℃，用时取50微升加入50毫升培养基。 IPTG：8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后定溶至10ml，0.22um滤器过滤除菌，分装，-20℃保存。 X-gal储液(20mg/ml): 用二甲基甲酰胺溶