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第十六章 细菌基因工程;细菌与基因工程关系密切;细菌基因工程的发展简史;细菌基因工程的发展现状;细菌是生产蛋白药物的最好生物反应器;2、细菌工程菌与环境保护;应用范围： 工业和生活废水治理 重金属污染土壤的生物修复 (bioremediation) 农药残留的微生物降解 生物制浆和生物漂白 石油污染的消除 友好可再生材料的合成等 ;超级工程菌(superbug);3、细菌工程菌与食品、饲料及其他工业;4、细菌工程菌与农业生产;第二节 细菌基因工程的表达系统 ;一 表达载体构建原??;1. 启动子的选择;2. 转录的有效性;3. 翻译起始的有效性 翻译起始是多种成分包括mRNA、16SrRNA、fMet-tRNA，核糖体S1蛋白、蛋白合成起始因子之间的协同作用的过程。 要使翻译起始效率最高，要满足以下条件： ①选用最佳起始密码子AUG（偶尔为GUG和UUG）； ②S-D序列（Shine-Dalgarno sequence）接近或与以下序列完全相同：5′…AGGAGG…3′； ③除S-D序列外，处于起始密码前的两个核苷酸应该是A和U； ④如果在起始密码AUG后的序列是GCAU或AAAA序列，能使翻译效率提高； ⑤在翻译起始区不能形成明显的二级结构。;4.翻译的有效终止;二 外源基因表达的方式;2．构建可分泌蛋白，分泌到胞外培养基中;3. 外源蛋白在宿主细胞中以包涵体的形式表达;4. 外源基因在细胞表面的表达（表面展示技术cell surface display ）;三、常见细菌表达系统;1、革兰氏阴性细菌通用的表达载体;克隆载体pAV10;2、枯草芽胞杆菌表达系统;pDG148-Stu克隆表达载体的结构特点;pDG148-Stu克隆表达载体;（2）整合载体(integration vector);3、微生物细胞表面表达系统;为了将目的蛋白展示于微生物细胞表面，需要构建目的蛋白和外表面蛋白的融合。 大多数目的蛋白位于融合蛋白的N端或C端，有时目的蛋白的短片段也可以在融合蛋白的中间表达。 ;微生物细胞表面展示技术的应用;第三节 细菌基因工程的应用;基因工程的实践主要有3种表现形式;细菌基因工程的应用;农业领域的基因工程细菌;农用抗生素产生菌的遗传操作 杀虫抗病重组微生物 其它重组杀虫抗病微生物 （1）生物囊杀虫剂 （2）基因工程抗病菌 （3）杀虫抗病工程菌 ; 将Bt毒素蛋白基因转入萤光假单胞菌，使之形成伴胞晶体，将菌体杀死但不破坏伴胞晶体而且菌体外形保持完整，其有效期平均增加了两百多倍，无污染，成为一种新型的微生物杀虫剂，用于蔬菜害虫防治。;（二）微生物肥料;重组根瘤菌;食品和工业基因工程菌 ;氨基酸工程菌的应用 ;氨基酸的基因工程菌;合成L-抗坏血酸的重组菌;生产酶制剂的工程菌;利用重组大肠杆菌从色氨酸合成靛蓝;重组DNA技术生产医用抗生素;利用链霉菌合成新抗生素; ;环境微生物基因工程菌的应用;修复重金属污染土壤的表面展示基因工程菌;重组富养罗尔斯通氏菌（R. eutropha）MTβ对重金属污染土壤的修复（Valls等，2000） A，(1)15天烟草苗生长在灭菌对照土壤中；(2)土壤中接种富养罗尔斯通氏菌(R. eutropha) CH34 108个/g土；(3)土壤中接种重组富养罗尔斯通氏菌(R. eutropha) MTβ108个/g土；B，土壤含镉（Cd2+）150?mol/Kg土，(1),(2)和(3)的处理同A。 ;此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！