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西南大学生命科学学院
2014年7月8日;一、PCR技术与基因扩增;实验设备与药品;PCR（Polymerase Chain Reaction）;;PCR的基本原理;PCR扩增体系（50ul体系）
1ul 模板DNA
40.5ul ddH2O
5ul 10×PCR Buffer
1ul 引物R
1ul 引物F
1ul dNTPs
0.5ul Taq DNA聚合酶（5U/ul）
;扩增参数设定
放入PCR仪，设定扩增参数：
（1）94 ℃预变性 3min；
（2）94 ℃变性 35s ，55 ℃退火35，72 ℃延伸 35min ；30个循环
（3）72 ℃延伸 8min；
（4）4 ℃保存。;电泳检测
取10ul 扩增产物，加入溴酚蓝2ul，在1×TAE电泳缓冲液中，用1.5％琼脂糖电泳分析（100V，45min），电泳后在成像系统下观察照相，检查反应产物及长度。;;;;二、低温诱导植物细胞染色体加倍;实验原理;实验材料;实验器具与药品;实验步骤;材料处理与准备;实验步骤;固定;实验步骤;解离;实验步骤;制片;实验步骤;染色;三、细胞DNA与RNA的观察; 甲基绿—派洛宁（Methyl green-Pyronin）为碱性染料，它能分别与细胞内的DNA、RNA结合而呈现不同颜色。当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿与空间构型完整的DNA亲和力高，并且甲基绿分子中的两个含N基团带正电荷正好与DNA分子的负电基团相结合，这样甲基绿和染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝绿色；而派洛宁与核仁、细胞质中与聚合程度较低的的RNA选择结合显示红色。;试剂配置;1、撕取洋葱鳞茎内表皮一小块置载玻片上；
2、加一滴染液，染30分钟；
3、用自来水冲洗一次，加上盖玻片，用吸水纸吸干水分，镜下观察。;细胞核;谢谢！
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