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原代细胞的培养
细胞实验设计;第一节、原代细胞培养;;原代细胞的培养是从供体取得组织细胞在体外进行的首次培养，是建立细胞系的第一步。
原代细胞生物学特性未发生很大变化，最接近和反映体内生长特性。;;一、原代细胞的取材 ;;二、原代细胞的分离和制作 ;;2、实体组织材料的分离方法
实体组织细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用：
（1）机械分散法
（2）消化分离法
;（1）机械分散法;;（2）消化分离法;1）酶消化分离法;;② 酶的活力：新鲜配制，低温保存。
③ 酶的浓度: 为0.1%-0.25%。
④ 温度: 常用的温度为37 ℃。
⑤ pH: 选用7.6~8.0之间。
;;（b）胶原酶（Collagenase）;;胶原酶Ⅰ：用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。
胶原酶Ⅱ：适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。
胶原酶Ⅳ：包含至少7种蛋白酶成分，能消化多种组织。
胶原酶Ⅴ：可用于胰腺小岛组织的分离;（2）非酶消化法（EDTA消化法）;;消化分离法的操作步骤：;;注意事项;三、原代细胞的培养方法 ;1. 淋巴细胞分离原理（密度梯度离心）;2. 淋巴细胞分离步骤：;;注意事项;2、组织块培养法（组织培养）;举例：贴块法培养血管平滑肌细胞;;7-9天开始有细胞从组织块周围爬出;3. 消化法原代培养HUVEC;;;四、培养细胞的纯化;1、自然纯化;2、人工纯化;（2）机械划除法;（3）反复贴壁法;（4）培养基限定方法;;（5）克隆法
采用细胞克隆法将细胞分成单个细胞，使之分别生长成克隆，选择出所需要的克隆。
（6）流式分选;第二节、细胞实验设计;;;;;;;;;
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