氨基酸纸层析糖旋光的测定.pptxVIP

实验五氨基酸的纸层析糖旋光度的测定; 1.学习层析（色谱）分离技术。 2.学习旋光度测定技术。;一、氨基酸的纸色谱;按分离机制，可分为： 吸附色谱：分子在两相中吸附性能不同，进行分离 分配色谱：分子在两相中分配系数不同，进行分离 离子交换色谱：分子在两相中离子交换性能不同，进行分离 体积排阻色谱：体积大的留在固定相的小孔内，体积小的先 流出。 亲和色谱：分子在两相中亲和力不同，进行分离。 电泳色谱、电色谱：离子在电场中移动的速度不同进行分离;??操作方式不同，又可分为： 柱色谱 气相色谱 高效液相色谱 薄层色谱 纸色谱 等;纸色谱： 为分配色谱，滤纸为载体，固定相为滤纸上的水分，流动相（展开剂）为用水饱和过的有机溶剂。 操作技术：上行法、下行法、环行法 ;纸色谱、薄层色谱的一般操作步骤;1.制板（纸）;将一个1.5cm 长、1cm 宽的滤纸，剪成扇子状，并卷起来;在滤纸中央，用铅笔画一个半径0.5cm的圆圈（直径一角硬币大小）。 在圆圈中心扎一个孔，插入准备好的滤纸芯儿。 插入时，滤纸芯的扇花部分插进滤纸孔一小部分，以盖到培养皿上方时不碰到液体为准。;;3.展开;本次纸色谱实验展开步骤： 1.在培养皿中加入适量展开剂 2.把点好样的滤纸放到培养皿上，注意滤纸芯儿不能碰展开剂。盖上培养皿饱和5~10分钟。 3.把滤纸芯儿压下去，使滤纸芯儿的另一端稍微扇开，并接触展开剂，开始展开。 4.当流动相（展开剂）的前沿到达滤纸边1cm左右时，停止展开，立即取出滤纸，用铅笔画出展开剂前沿线。 5.去溶剂：烘干;4.显色;5.计算比移值;2、影响旋光度的因素 测定波长、浓度、测定管长度、溶剂、温度;1）按通电源，预热约5min 2）零点误差校正 选定并清洗测定管：用水洗（留意密封垫和玻璃透光片，不要宁得太紧，否则读数不准） 装入水：排气泡，旋上螺盖（不易过紧） 放入样品管槽：玻璃泡部位在上部 ①调零点视野确定零点误差：数值与误差方向 检查旋光仪零位是否准确，即在旋光仪未放试管或放进充满蒸馏水的试管时，观察零度时视场亮度是否一致。如不一致，说明有零位误差，应在测量读数中减去或加上该偏差值。 ;②测定旋光读数：转动度盘、检偏镜、在视场中觅得亮度一致且暗的位置，再从度盘上读数。读数是正（顺时针方向旋转）的为右旋物质，读数是负（逆时针方向旋转）的为左旋物质。 ;读数方法： 主尺分180格，每格1°；游标尺分10格，每大格0.1 °，每小格0.05 ° 。 1.先看游标尺0刻度线指向主尺的哪两个数之间：图中9和10 之间 则旋光度为9.x 2.看游标尺刻度线与主尺刻度线重合的位置：图中游标尺的3 则代表0.30 因此该物质旋光度为 右旋9.30 °;;;（3）已知浓度的葡萄糖的测定： 试样管润洗、装入10%葡萄糖溶液（0.1g/ml)，调零点视场并读数。 （4）稀释葡萄糖的测定，确定旋光方向： 取出样品管，加入葡萄糖的稀释溶液，调零点视场并读数。 （5）未知浓度的葡萄糖的测定： 取出样品管，加入不知浓度的葡萄糖溶液，调零点视场并读数。 （6）结果处理： 扣除零点误差：同方向减，异方向加。 由已知样算出比旋光度，再结合未知样的旋光度，算出未知样的浓度。;