发光法测定菌体atp含量.pptxVIP

发光法测定菌体ATP含量;一.实验目的;二.实验原理; 1.ATP生物发光工作原理;; 当细胞受损或死亡时，其ATP值迅速下降或消失，基于这一原理，检测细胞内的ATP含量，即可反应细胞的存活状况，ATP浓度与活细胞数密切相关。 检测时先将ATP与提取剂充分混合，使细胞壁和细胞膜裂解，释放ATP，再加入荧光素-荧光素酶，ATP在荧光素和荧光素酶的作用下，使其释放磷酸基团同理发出荧光，用生物荧光仪检测相对荧光强度（relative light units,RLU）,由此测出ATP含量，进而反映活细胞数。;; 2.ATP生物发光特点;3.应用研究;新药筛选及疗效评价：广泛应用于需要进行大量快速初选工作的新药筛选中。 细胞免疫活性检测应用：ATP生物发光法还可测定T细胞的免疫活性。 ;三.试剂; 取0.5ml的标准ATP试剂（10-7mol/l）到5ml的容量瓶中，加入缓冲液定容，得到10-8mol/l的标准ATP试剂。 用移液管取5ml的上述标准ATP试剂到50ml的容量瓶中，加入缓冲溶液定容，得到10-9mol/l的标准ATP试剂。 重复以上过程，得到10-10mol/l和10-11mol/l的标准ATP试剂。; 3.缓冲液; 4.ATP提取液;四.实验材料与仪器;五.操作步骤;TCA法